2023-03-04
一、盂唇結(jie)構簡介
盂(yu)(yu)(yu)唇(chun)是一種緊緊附(fu)著(zhu)在關節(jie)窩邊(bian)緣(yuan)的(de)纖(xian)維結構，亦為(wei)盂(yu)(yu)(yu)韌帶，起(qi)到了增大(da)關節(jie)窩與肱骨頭(tou)或股骨頭(tou)之間接(jie)觸面(mian)積(ji)(ji)的(de)作用，主要由纖(xian)維軟(ruan)骨或者致密(mi)結締組織所(suo)組成(cheng)；盂(yu)(yu)(yu)唇(chun)的(de)橫切面(mian)呈(cheng)現三角形，底(di)部固定于關節(jie)腔，而其(qi)自由面(mian)薄(bo)且尖。盂(yu)(yu)(yu)唇(chun)的(de)內表面(mian)被(bei)滑膜(mo)所(suo)覆(fu)蓋，外表面(mian)則(ze)與關節(jie)囊相(xiang)連接(jie)，且盂(yu)(yu)(yu)唇(chun)會(hui)隨著(zhu)骨頭(tou)的(de)旋轉進行調整，從而增加(jia)了關節(jie)窩邊(bian)緣(yuan)的(de)靈(ling)活性；而關節(jie)附(fu)近的(de)肌肉則(ze)加(jia)強了盂(yu)(yu)(yu)結構的(de)穩(wen)定性。盂(yu)(yu)(yu)唇(chun)組織的(de)體積(ji)(ji)會(hui)發生變化(hua)，前唇(chun)更厚，且有(you)時(shi)比后唇(chun)更大(da)。 盂唇組(zu)(zu)(zu)(zu)織(zhi)組(zu)(zu)(zu)(zu)織(zhi)解離(li)主(zhu)要難點在于，組(zu)(zu)(zu)(zu)織(zhi)主(zhu)要由纖維組(zu)(zu)(zu)(zu)成(cheng)，組(zu)(zu)(zu)(zu)織(zhi)緊密且具有(you)一定的(de)(de)(de)韌性(xing)，這導致(zhi)了酶無法(fa)有(you)效的(de)(de)(de)對(dui)組(zu)(zu)(zu)(zu)織(zhi)進(jin)行消化(hua)從而(er)延(yan)長了解離(li)時(shi)(shi)間(jian)，進(jin)而(er)對(dui)組(zu)(zu)(zu)(zu)織(zhi)解離(li)程度的(de)(de)(de)判(pan)斷也有(you)一定要求，需要靈活(huo)的(de)(de)(de)把(ba)握時(shi)(shi)間(jian)，同時(shi)(shi)對(dui)于此類長時(shi)(shi)間(jian)消化(hua)的(de)(de)(de)樣(yang)本，應緩慢的(de)(de)(de)逐步進(jin)行，避(bi)免突然改變細胞(bao)環境造(zao)成(cheng)的(de)(de)(de)細胞(bao)應激(ji)。接(jie)下來小派為大家分(fen)享實(shi)驗方案并展示結(jie)果。
二、人盂唇(chun)組織解(jie)離方案 人盂唇組織 1.實驗試劑配置：（1）適當體積復合酶(mei)液 （2）含2% FBS的DPBS，冰上預冷 （3）完全(quan)培養基(ji)：含10% FBS的DMEM 2.預處理：從組(zu)織保存液中(zhong)取出(chu)組(zu)織樣本，放入預冷的(de) DPBS中(zhong)清洗(xi)一到兩遍(bian)，使(shi)用眼科剪將(jiang)組(zu)織盡可能(neng)的(de)剪切成1~2mm3，用預冷的(de)DPBS清洗(xi)組(zu)織塊。 3.組織(zhi)(zhi)消(xiao)化(hua)(hua)：將剪碎(sui)的組織(zhi)(zhi)轉(zhuan)移至復合(he)酶液中(zhong)，置于(yu)37℃水(shui)浴中(zhong)振蕩(dang)消(xiao)化(hua)(hua)20min，用巴士吸管吹打8-10次(ci)后繼續(xu)消(xiao)化(hua)(hua)20min（該操作重復2次(ci)），共計消(xiao)化(hua)(hua)60min，完(wan)全培養基終止消(xiao)化(hua)(hua)，過30um細胞篩收集懸液，置于(yu)冰上暫(zan)存。 4裂(lie)紅：將細(xi)胞懸液(ye)4℃ 400×g 離心5 min，棄上清，加入2mL體積1X RBC，室(shi)溫放置3min，加入適量DPBS終止(zhi)，4℃ 300×g 離心5 min。 5清(qing)洗：離心后棄上清(qing)，加(jia)入(ru)3mL DPBS重懸沉淀，4℃ 300×g 離心5 min。棄上清(qing)，用適量DPBS(含(han)2% FBS)重懸細胞，進行熒光(guang)計數及臺盼藍鏡檢，調(diao)整濃度至(zhi)700-1200cells/ul后上機(ji)。 （若離心重懸后出現活率不足(zu)80%，需(xu)要(yao)進行去(qu)除死細胞處理。若出現碎片較多，則需(xu)要(yao)進行去(qu)碎片操(cao)作。）
三(san)、結(jie)果(guo)展示 活(huo)性、濃(nong)度檢測 96%活率(lv)，濃度1030個cells/ul，總量6W左(zuo)右(you)。 數據質控 上圖是下機數據cellranger質控(kong)結果，細胞(bao)捕獲(huo)數及基因數都符合前期需求。
