全基(ji)因合成簡介

在我們的實驗(yan)工作(zuo)中，如果采用一般(ban)實驗(yan)手段無法得到目的基(ji)因(yin)時，可以進行實驗(yan)室(shi)人工合成(cheng)(cheng)。公司(si)擁(yong)有成(cheng)(cheng)熟的基(ji)因(yin)合成(cheng)(cheng)技術，可根(gen)據客戶(hu)要求，以具(ju)競爭(zheng)力的價格和快捷(jie)的交(jiao)貨周期提供(gong)全(quan)基(ji)因(yin)合成(cheng)(cheng)服(fu)務(wu)及相(xiang)關服(fu)務(wu)。合成(cheng)(cheng)的基(ji)因(yin)可以根(gen)據客戶(hu)的需求連接到不同的載體上，最終提供(gong)的產品包括(kuo)合成(cheng)(cheng)報告、測序報告、質粒酶切(qie)圖譜、凍干質粒以及含(han)有該質粒的菌株。 

 一、應用(yong)領域(yu)：

1. 基因(yin)突(tu)變 / 重組 / 高效表達。

2. 其他(ta)方法難獲得的 cDNA。

3. 合成不同(tong)的基因變異或新基因。

4. 用于(yu)微芯片的大量 cDNA 。

二、服(fu)務(wu)特色： 

1. 免費提供基因的參考設(she)(she)計(ji)方案，包括設(she)(she)計(ji)酶切位點(dian)，密(mi)碼子優化等。

2. 基(ji)(ji)因(yin)(yin)合成(cheng)周期短，嚴格按照(zhao)與用戶簽(qian)定(ding)的基(ji)(ji)因(yin)(yin)合成(cheng)服務協議和保密合同執行。

3. 能合成長度達 10 kb 的基因(yin)。

4. 基因克隆(long)到用戶(hu)指定或提供的表達(da)載體上(shang)。

三、服務流程： 

1. 收到客(ke)戶(hu)提(ti)供序列(lie)后，確定使用(yong)何種酶切位(wei)點(dian)克(ke)隆，克(ke)隆到何種載體等等，然(ran)后對全序列(lie)進行編輯(ji)，傳至客(ke)戶(hu)確認。

2. 經分析(xi)確(que)認達成一致意見后，簽訂基(ji)因合成服務協(xie)議與保密合同。基(ji)因合成服務協(xie)議簽定(ding)后，客(ke)戶需預(yu)付50% 的(de)合成費用(yong)，本公司方開始合成。交貨期也從即日開始。

3. 設計(ji)Oligo合成(cheng)方案(an)，在(zai)全(quan)自動合成(cheng)儀(yi)器上進(jin)行單鏈(lian)的化學(xue)合成(cheng)。

4. 通過(guo)OVER-LAP的PCR，把單鏈Oligo拼接成雙(shuang)鏈的全長(chang)基因。

5. 將PCR產物酶切、純化，連接到質(zhi)粒中，將質(zhi)粒轉入細胞株培養。

6. 提取(qu)陽性克隆(long)進行DNA測序，確(que)認插入片(pian)段的準確(que)性。

7. 對(dui)可能存在的(de)錯誤(wu)位點用定(ding)點突變的(de)方法加以改正，再經測序驗(yan)證(zheng)。

8. 提供實驗報告，包括裝(zhuang)載目(mu)的基因的質粒、細菌(jun)株、測序圖譜 / 序列。

9. 合成完(wan)畢(bi)后，本公(gong)司通(tong)知客戶，收到全(quan)部(bu)貨款(kuan)，本公(gong)司開始發(fa)貨 。

四、情(qing)況(kuang)說明(ming) 

1. 由(you)于基因(yin)結構的(de)復(fu)(fu)雜性，對于較長的(de)片(pian)段或一(yi)些復(fu)(fu)雜結構如重復(fu)(fu)序列、高 GC 片(pian)段等(deng)，可能會需(xu)要(yao)額(e)外的(de)時(shi)間調整合成方案。如果(guo)發生這種情況(kuang)，技術人(ren)員(yuan)會及時(shi)與您聯系，告知您合成進(jin)程。

2. 所合(he)成(cheng)的(de)基(ji)因一般克隆于(yu)通用(yong)載體(ti)中(zhong)(zhong)，如需克隆在客戶指定(ding)的(de)載體(ti)中(zhong)(zhong)，我公(gong)司(si)會酌情再收取(qu)一定(ding)的(de)費(fei)用(yong)，并(bing)且(qie)交(jiao)貨時間會適當延長(chang)。

五(wu)、密碼子優化：

　　對于密碼子優化服務，在(zai)提供需要優化和(he)合成的(de)基因序列(lie)的(de)同時，我們(men)還需要如下訊(xun)息：

1. 需要合成(cheng)的蛋白(bai)或 DNA 序列。

2. 宿主表達系統。

3. 兩端的限制(zhi)性酶切位點。

4. 優化(hua)后(hou)的序列中需要避免的限制性(xing)酶切(qie)位點(dian)。

5. 優(you)化(hua)后(hou)的序(xu)列(lie)中需要(yao)保留的限制性酶切位(wei)點。

六、合成完(wan)成后向客戶提供的(de)技術(shu)資料(liao)與產品 

1. 不少(shao)于2ug的含目(mu)的基(ji)因的通用載體質粒一份。

2. 含上述質粒的(de)大腸桿菌菌株(zhu)一份。

3. 基因(yin)序列的(de)原始報告測(ce)序(xu)正本一(yi)份。

4. 基因合成報告(gao)一份。

七、全基因(yin)合成服務要求 

1.  請將您需要合(he)成的基(ji)因全序列(lie)以 E-mail 或(huo)傳(chuan)真的形式告知公(gong)司(si)(si)的業務員或(huo)公(gong)司(si)(si)的技術員。

2.  請(qing)說(shuo)明實驗的(de)具體(ti)要(yao)求，如：使用何種(zhong)酶切位點(dian)進行克(ke)隆以(yi)及需克(ke)隆于何種(zhong)載體(ti)等。

3.  測序結果(guo)如果(guo)發(fa)現有錯(cuo)誤位點(dian)，我們會(hui)采(cai)取相(xiang)應(ying)的技術手段進行修復(fu)校對。

4.  提(ti)供實(shi)驗結(jie)果：包括實(shi)驗操作(zuo)規程、測(ce)序結(jie)果、測(ce)序彩(cai)色峰圖、含有合成基(ji)因的(de)(de)質粒及含該(gai)質粒的(de)(de)菌體( 穿刺菌 )等。

定點突變(bian)

通過實驗方法可以向(xiang)目的基因片段中(zhong)引入所需的 DNA 變異，包括堿基添(tian)加、刪除、點突變等。

（一）服務要求

1. 請您通過業務員或技術員提供需要進行突變基因的詳細序列；突變前序列請標注為： Wild sequence ；突變后序列請標注為： Mut sequence 。
2. 請提供突變基因克隆操作的詳細背景資料，例如使用何種限制酶酶切位點、克隆于何種載體等。
3. 請說明實驗的具體要求，詳細情況請參考如下：

客戶常問的幾個問題：

1.如果(guo)想在貴公司做(zuo)與(yu)基因工程相(xiang)關的技術服務，該(gai)如何聯(lian)系?

可以直接(jie)通過(guo)業務員或公司的技(ji)術(shu)部聯(lian)系；同(tong)時提供詳細的背景(jing)資(zi)料(liao)、實驗(yan)要求等(deng)。技(ji)術(shu)人員經(jing)過(guo)研(yan)討后(hou)將與您聯(lian)系，共同(tong)制定實驗(yan)方案，并告知您具體的服務價格和(he)完成時間；我們將在收(shou)到您同(tong)意(yi)實驗(yan)的文字資(zi)料(liao)與實驗(yan)材料(liao)后(hou)立即(ji)開(kai)始(shi)實驗(yan)。

2.貴(gui)公司對我們提(ti)供(gong)的實驗材料有何具體要求?

（1） 對實驗材料中涉及病原體等危險的材料拒絕接受。
（2） 在實驗材料中涉及到的堿基序列須以電子版的形式提供. 
（3）實驗中使用的載體等要盡量提供詳細的背景資料（如質粒大小、抗性、拷貝數、多克隆位點等 ） ；如 果為商品化載體，請提供生產廠家及標準名稱；如果所提供載體是您自己構建的，請注明大體結構情況。
（4）實驗中如果使用氨芐青霉素、氯霉素、鏈霉素、卡那霉素以外的抗生素時，抗生素需您自己提供。
（5）您自己提供的引物如果為干品，請標明具體的 OD 數；如果為液體狀態，請標明具體濃度。

3.公司(si)能免費(fei)提供哪些載體和引(yin)物?

公(gong)司免(mian)費提供測序及 PCR 擴增用的(de)通用引物： Bca BEST Primer M13(-47) 、 Bca BEST Primer RV-M 、 T3 Promoter 、 T7 Promoter 、 AOX 3" 、 AOX 5" 、 pGEX 3" 、 pGEX 5" 以(yi)及 SP6 Promoter 等。

4. 基因工程操作服務(wu)通常(chang)耗時較長，如(ru)果想了解實驗進展(zhan)情況該怎(zen)么(me)辦?

公司在每周五以 E-mail 的形(xing)式將實驗進(jin)展的大(da)體情(qing)況通知客戶；您也(ye)可(ke)以向業務員查詢(xun)；也(ye)可(ke)以直接與技術人員交流溝通。

（二）操作程序

1. 具體(ti)聯系方式請參考“  ”。
2. 如您提供的模板序列為非公司的測序結果，我們將首先對模板進行測序并將與您溝通測序結果。
3. 根據突變方案設計合成突變引物，進行基因突變實驗的 PCR 反應，克隆變異體。
4. 進行 DNA 測序驗證突變序列的正確性。
5. 提供實驗結果，包括實驗操作規程、突變用引物、質粒變異體以及含有該質粒的菌種（穿刺菌）、測序結果、測序彩色峰圖等。
6. 1 kbp 以下的 DNA 片段克隆在普通載體上的單點突變的時間約需 10 天左右。

（三）收費標準

* 價格可能會隨市(shi)場有(you)所波動(dong)，歡迎(ying)咨詢當地銷(xiao)售!