全基因合成簡介

在(zai)我們的(de)(de)實(shi)驗工作(zuo)中，如果采用(yong)一(yi)般(ban)實(shi)驗手段無法(fa)得到目的(de)(de)基(ji)因時，可以進行實(shi)驗室人工合(he)成。公司擁有成熟的(de)(de)基(ji)因合(he)成技術，可根(gen)據客(ke)戶(hu)要求(qiu)，以具競爭力的(de)(de)價格和快捷(jie)的(de)(de)交(jiao)貨周期提供(gong)全基(ji)因合(he)成服(fu)務及相關服(fu)務。合(he)成的(de)(de)基(ji)因可以根(gen)據客(ke)戶(hu)的(de)(de)需(xu)求(qiu)連接到不同(tong)的(de)(de)載(zai)體上，最(zui)終(zhong)提供(gong)的(de)(de)產品包(bao)括合(he)成報(bao)告(gao)、測序報(bao)告(gao)、質(zhi)粒(li)酶切圖譜、凍干質(zhi)粒(li)以及含有該質(zhi)粒(li)的(de)(de)菌(jun)株(zhu)。 

 一、應用領域：

1. 基因突變 / 重組 / 高效表達。

2. 其(qi)他方法難獲得的 cDNA。

3. 合(he)成不同的基(ji)因變異或(huo)新基(ji)因。

4. 用(yong)于微芯片的大量 cDNA 。

二、服(fu)務特色： 

1. 免費提供(gong)基因(yin)的(de)參考設計方案，包(bao)括設計酶切位(wei)點，密碼子優化等。

2. 基因合成周期短，嚴格按照與用戶簽(qian)定(ding)的基因合成服務協(xie)議和保(bao)密合同執(zhi)行。

3. 能合成長度(du)達 10 kb 的(de)基因。

4. 基因克隆到用戶(hu)指定或提供的表達(da)載體(ti)上(shang)。

三(san)、服務流程： 

1. 收到客戶提供序列后，確定(ding)使用何種(zhong)酶切位點克隆，克隆到何種(zhong)載體(ti)等等，然后對全序列進行編輯，傳至客戶確認。

2. 經(jing)分析確認達(da)成一致意見后，簽訂(ding)基(ji)因(yin)合(he)成服務協(xie)議(yi)與保(bao)密合(he)同(tong)。基(ji)因(yin)合(he)成服務協(xie)議(yi)簽定后，客(ke)戶需預付50% 的合(he)成費用，本公司方(fang)開始合(he)成。交貨期也從即日開始。

3. 設計Oligo合(he)成方(fang)案，在全自(zi)動(dong)合(he)成儀器上進行單鏈的化學合(he)成。

4. 通(tong)過OVER-LAP的PCR，把單鏈(lian)Oligo拼接成雙鏈的全長基因。

5. 將PCR產(chan)物酶切、純(chun)化，連接(jie)到質(zhi)(zhi)粒中，將質(zhi)(zhi)粒轉入細胞株培養。

6. 提取陽性克隆進行DNA測序，確認插入片段的準確性。

7. 對可能(neng)存在的(de)(de)錯誤位(wei)點用(yong)定點突變的(de)(de)方法加以改(gai)正，再經測序(xu)驗證(zheng)。

8. 提供(gong)實驗報告，包(bao)括裝載目的(de)基因的(de)質粒、細菌株(zhu)、測序圖譜 / 序(xu)列(lie)。

9. 合成(cheng)完畢后，本(ben)(ben)公司通知客戶(hu)，收到全部貨(huo)款，本(ben)(ben)公司開始發貨(huo) 。

四、情(qing)況說明 

1. 由于基(ji)因結構(gou)的(de)復雜(za)性(xing)，對(dui)于較(jiao)長的(de)片(pian)段或一些復雜(za)結構(gou)如重復序(xu)列、高 GC 片(pian)段等，可能會需要額外(wai)的(de)時間調整合(he)成方(fang)案。如果(guo)發(fa)生這種情況，技術人員會及時與您聯(lian)系(xi)，告知(zhi)您合(he)成進(jin)程。

2. 所(suo)合成的(de)基因(yin)一(yi)(yi)般克(ke)隆(long)于通用載體中(zhong)，如(ru)需克(ke)隆(long)在客(ke)戶指定(ding)的(de)載體中(zhong)，我公司會酌(zhuo)情(qing)再收取一(yi)(yi)定(ding)的(de)費用，并且交(jiao)貨時間(jian)會適當延(yan)長。

五、密碼子優化：

　　對于密碼(ma)子(zi)優化服務，在提供需要優化和合成的(de)基因序列的(de)同(tong)時(shi)，我們還需要如下訊(xun)息：

1. 需要合成的蛋白或 DNA 序列。

2. 宿主表(biao)達系統。

3. 兩端的限制(zhi)性(xing)酶(mei)切位點。

4. 優化后(hou)的(de)序(xu)列中需要(yao)避免(mian)的(de)限(xian)制性酶切(qie)位(wei)點。

5. 優(you)化后的序列中(zhong)需(xu)要(yao)保留的限(xian)制性(xing)酶切位點。

六、合成完(wan)成后(hou)向客戶(hu)提供的技術資料與(yu)產品(pin) 

1. 不少于2ug的(de)含(han)目(mu)的(de)基因(yin)的(de)通(tong)用載體質粒一(yi)份。

2. 含上述質粒的大腸桿菌(jun)菌(jun)株一份。

3. 基因序列的原始報告(gao)測(ce)序(xu)正本(ben)一(yi)份。

4. 基因合成報告一份。

七、全(quan)基因合成(cheng)服(fu)務要求 

1.  請(qing)將(jiang)您(nin)需要合(he)成的(de)基因(yin)全序(xu)列(lie)以 E-mail 或(huo)傳真的(de)形式告知公(gong)司(si)的(de)業務員(yuan)或(huo)公(gong)司(si)的(de)技術(shu)員(yuan)。

2.  請說明實(shi)驗(yan)的具體要求(qiu)，如：使用何種酶切位點進行克隆以(yi)及需克隆于何種載(zai)體等。

3.  測(ce)序(xu)結(jie)果(guo)如果(guo)發現有(you)錯誤位點，我們會采取相(xiang)應的技(ji)術手(shou)段進行修復校對。

4.  提供(gong)實驗(yan)結(jie)果(guo)：包括實驗(yan)操作規程(cheng)、測(ce)序結(jie)果(guo)、測(ce)序彩色峰圖(tu)、含有合成(cheng)基(ji)因(yin)的(de)質粒及含該質粒的(de)菌(jun)體( 穿刺菌(jun) )等。

定(ding)點(dian)突變

通(tong)過實驗方法可以向目的(de)基(ji)因片(pian)段中引入所需(xu)的(de) DNA 變(bian)異，包(bao)括堿基(ji)添(tian)加、刪除、點突變(bian)等。

（一）服務要求

1. 請您通過業務員或技術員提供需要進行突變基因的詳細序列；突變前序列請標注為： Wild sequence ；突變后序列請標注為： Mut sequence 。
2. 請提供突變基因克隆操作的詳細背景資料，例如使用何種限制酶酶切位點、克隆于何種載體等。
3. 請說明實驗的具體要求，詳細情況請參考如下：

客戶常問的幾個問題：

1.如(ru)果(guo)想在貴公(gong)司做與基因工(gong)程相關的技術服務，該如(ru)何聯系?

可以直接通過業務員(yuan)或公司的技(ji)術(shu)部聯系；同時提供詳(xiang)細(xi)的背景資(zi)料、實驗要求等(deng)。技(ji)術(shu)人員(yuan)經過研討(tao)后將與您(nin)聯系，共同制(zhi)定(ding)實驗方案，并告知您(nin)具(ju)體的服務價(jia)格(ge)和完成時間；我們(men)將在收到您(nin)同意實驗的文字資(zi)料與實驗材料后立即開始實驗。

2.貴公司對(dui)我(wo)們(men)提供的實驗材料有何(he)具體要求(qiu)?

（1） 對實驗材料中涉及病原體等危險的材料拒絕接受。
（2） 在實驗材料中涉及到的堿基序列須以電子版的形式提供. 
（3）實驗中使用的載體等要盡量提供詳細的背景資料（如質粒大小、抗性、拷貝數、多克隆位點等 ） ；如 果為商品化載體，請提供生產廠家及標準名稱；如果所提供載體是您自己構建的，請注明大體結構情況。
（4）實驗中如果使用氨芐青霉素、氯霉素、鏈霉素、卡那霉素以外的抗生素時，抗生素需您自己提供。
（5）您自己提供的引物如果為干品，請標明具體的 OD 數；如果為液體狀態，請標明具體濃度。

3.公(gong)司能免費提供哪些載體和引(yin)物?

公司免費提(ti)供(gong)測(ce)序及(ji)(ji) PCR 擴增用的(de)通用引(yin)物： Bca BEST Primer M13(-47) 、 Bca BEST Primer RV-M 、 T3 Promoter 、 T7 Promoter 、 AOX 3" 、 AOX 5" 、 pGEX 3" 、 pGEX 5" 以(yi)及(ji)(ji) SP6 Promoter 等。

4. 基(ji)因工程操作服(fu)務通(tong)常(chang)耗時(shi)較長，如果想了解實驗(yan)進展情況該怎么辦(ban)?

公司在(zai)每周(zhou)五(wu)以 E-mail 的形(xing)式將(jiang)實(shi)驗進展的大體情況(kuang)通(tong)知客(ke)戶；您也可以向業(ye)務員查詢；也可以直接與技術人員交(jiao)流溝通(tong)。

（二）操作程序

1. 具(ju)體聯系方式(shi)請參考“  ”。
2. 如您提供的模板序列為非公司的測序結果，我們將首先對模板進行測序并將與您溝通測序結果。
3. 根據突變方案設計合成突變引物，進行基因突變實驗的 PCR 反應，克隆變異體。
4. 進行 DNA 測序驗證突變序列的正確性。
5. 提供實驗結果，包括實驗操作規程、突變用引物、質粒變異體以及含有該質粒的菌種（穿刺菌）、測序結果、測序彩色峰圖等。
6. 1 kbp 以下的 DNA 片段克隆在普通載體上的單點突變的時間約需 10 天左右。

（三）收費標準

* 價格可能(neng)會(hui)隨市場有所波動(dong)，歡(huan)迎咨詢(xun)當(dang)地銷售!