甲基化BSP介紹(shao):
DNA甲基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)是(shi)較(jiao)早發現的(de)(de)修飾(shi)途徑之一(yi),真(zhen)核生物中甲基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)發生于胞(bao)(bao)嘧(mi)啶(ding),即在DNA甲基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)轉移酶(DNMTs)的(de)(de)作(zuo)用(yong)下的(de)(de)CpG二(er)核苷酸5’端的(de)(de)胞(bao)(bao)嘧(mi)啶(ding)轉變(bian)(bian)為(wei)5’-甲基(ji)(ji)(ji)(ji)胞(bao)(bao)嘧(mi)啶(ding)。大量研究表明,DNA甲基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)能引起染色質結構、DNA構象(xiang)、DNA穩定性(xing)及DNA與蛋白質相互(hu)作(zuo)用(yong)方(fang)(fang)式的(de)(de)改(gai)變(bian)(bian),從而控制(zhi)基(ji)(ji)(ji)(ji)因表達(da)。DNA甲基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)通(tong)常抑制(zhi)基(ji)(ji)(ji)(ji)因表達(da),去甲基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)則(ze)誘(you)導了(le)基(ji)(ji)(ji)(ji)因重新活化(hua)和表達(da),這種DNA修飾(shi)方(fang)(fang)式在不改(gai)變(bian)(bian)基(ji)(ji)(ji)(ji)因序列的(de)(de)前提下實現對基(ji)(ji)(ji)(ji)因表達(da)的(de)(de)調(diao)控。BSP(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)克隆(long)測序法(fa),是(shi)目(mu)前甲基(ji)(ji)(ji)(ji)化(hua)檢測的(de)(de)通(tong)用(yong)方(fang)(fang)法(fa)。
甲基化BSP實驗原理:
用亞硫酸(suan)氫鹽(yan)處理基(ji)(ji)因組DNA,未(wei)發生甲基(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)的(de)胞嘧啶被轉化(hua)(hua)(hua)為尿嘧啶,而甲基(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)的(de)胞嘧啶不變;隨(sui)后(hou)(hou)再CpG島兩端設計引物(wu)(wu)進行(xing)PCR,將目(mu)的(de)產(chan)物(wu)(wu)純化(hua)(hua)(hua)后(hou)(hou)進行(xing)TA克隆,每個克隆挑(tiao)取陽性克隆測序(xu),最后(hou)(hou)將測得的(de)序(xu)列與原(yuan)始序(xu)列比對,統(tong)計甲基(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)位點及數量,并分析甲基(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)程(cheng)度。
基于重亞硫酸(suan)鹽轉化的甲基化分(fen)析原理(li)
甲基化(hua)服務(wu)特點:
1、克(ke)服了MSP只能作定(ding)(ding)性研(yan)究(jiu),可做(zuo)定(ding)(ding)量(liang)研(yan)究(jiu);
2、敏感性高,待測DNA中5-甲基胞嘧啶(ding)分布不均(jun)衡(heng)也可(ke)檢測;
3、只(zhi)要客戶提供基因名稱或序列,我(wo)們免費設計引物;
4、周期快:2周出結果。