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科研服務

SSR / STR微衛星標記驗證

微(wei)衛星(microsatellite analysis)即(ji)短串聯重(zhong)(zhong)復序列(Short tandem repeat,STR),是由(you)(you)幾個(ge)堿(jian)基(ji)(ji)(ji)對(dui)作為單位(wei),串聯重(zhong)(zhong)復形(xing)成的(de)一(yi)類DNA序列,由(you)(you)于(yu)單位(wei)重(zhong)(zhong)復數目(mu)的(de)變化,構成了(le)STR基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)座的(de)遺傳多態性。由(you)(you)于(yu)其(qi)序列簡短 , 通過 PCR 很容易(yi)從基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)組 DNA 中(zhong)特異性地擴增出(chu)來(lai) , 大(da)大(da)簡化了(le)微(wei)衛星多態性分(fen)析(xi)(xi)(xi)的(de)操作。研(yan)究者需(xu)在目(mu)標基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)座設(she)計一(yi)對(dui)或多對(dui)引(yin)物(wu) , 通過 PCR 反應從模板 DNA 中(zhong)將該基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)擴增出(chu)來(lai) , 然后(hou)使用測(ce)序儀進行電泳分(fen)離分(fen)析(xi)(xi)(xi)即(ji)可。它具有(you)分(fen)布(bu)廣泛,易(yi)于(yu)檢測(ce),信息量(liang)大(da),有(you)高度多態性并遵循孟德爾共(gong)顯性遺傳等(deng)優點。目(mu)前STR分(fen)析(xi)(xi)(xi)已廣泛應用于(yu)遺傳制圖、連(lian)鎖(suo)性分(fen)析(xi)(xi)(xi)、親子鑒定、疾病(bing)基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)定位(wei)和(he)物(wu)種多態性研(yan)究等(deng)諸多領域。

 

一 、分(fen)型(xing)原(yuan)理

利(li)用(yong)熒光標記的(de)PCR引物對多(duo)(duo)(duo)個微衛星多(duo)(duo)(duo)態位(wei)點進行擴增(zeng)(zeng),然后采用(yong)高分(fen)辨率(lv)膠電(dian)泳(yong)(如用(yong)于測序的(de)毛細(xi)管電(dian)泳(yong)等(deng))對擴增(zeng)(zeng)片斷進行分(fen)離,通過熒光檢(jian)測系(xi)統(如ABI測序儀)確(que)定擴增(zeng)(zeng)片斷的(de)長(chang)度,實現對微衛星多(duo)(duo)(duo)態位(wei)點的(de)分(fen)型。

我公司采(cai)用ABI 3730測序(xu)儀對(dui)STR進行DNA片段(duan)分(fen)析(xi),提供(gong)完(wan)整解決方案:

  • 實驗方案的(de)設計(ji)(ji), 包括熒光標(biao)記(ji)的(de)選(xuan)擇(ze),引物的(de)設計(ji)(ji)、合(he)成和(he)標(biao)記(ji),內標(biao)的(de)選(xuan)用(yong)等(deng)等(deng);

  • 完成熒光 PCR ,并在測序儀上完成電泳(yong)掃描 , 數據采集;

  • 用軟件對分型數(shu)據(ju)進行處(chu)理分析 , 提供產(chan)物片段大小、數(shu)量多少(shao)的信息數(shu)據(ju); 

  • 我們最(zui)終提供(gong)微衛星座位PCR產物全自動檢測及分型結果。

 

二、 客戶提供

1)基因(yin)組DNA:至(zhi)少100 ng 樣(yang)品(每個多(duo)態性(xing)位點需樣(yang)品3-5 ul,濃(nong)度為30~50 ng/ul);樣(yang)品溶解在ddH2O中,如果(guo)不是,請注明(ming)其成分以(yi)及(ji)可能殘留(liu)的抑(yi)制劑(ji)類型。
2)PCR產物:特異性(xing)好。
3)如(ru)需(xu)設(she)計引(yin)物,請提供目的片段序列(lie)或者(zhe)微衛星(xing)檢測位點,引(yin)物設(she)計好后需(xu)客戶確(que)認

 

三、 實(shi)驗步驟

客戶提(ti)供血(xue)液樣本或DNA樣本——確定STR位點,設計合成特異PCR擴增引物(熒光標記引物)——進行PCR擴增,通過測序儀電泳檢測,獲得擴增片段相關數據——ABI3730XL 測序儀讀出擴增片段大小信息。



 

四 、收費(fei)標準 

定區域位點的掃描 

普通引物:1.50元(yuan)/堿(jian)基 

引物費(fei)用:我們推(tui)薦的熒光標記有FAM 、 HEX ;、 NED 等,合(he)成費(fei)用查詢合(he)成報價

PCR費用:20元/樣本,包括預實(shi)驗和檢測。

分型費用(yong):如(ru)果您已(yi)經完成 PCR 擴增(zeng),進行電泳(yong)分型、數據處理,包含內(nei)(nei)標價(jia)格為 10元 / 樣本。不包含內(nei)(nei)標價(jia)格為 8元 / 樣本,不足 96 個的按照(zhao) 96 個收(shou)費。