Oligo DNA的(de)(de)人(ren)工化學(xue)合(he)成始于50年代(dai)初期，1980年，全自動的(de)(de)固相DNA合(he)成儀面市后，使得(de)快(kuai)速合(he)成Oligo DNA成為(wei)(wei)可(ke)能，這推動了生(sheng)物工程(cheng)技術(shu)的(de)(de)蓬勃發展(zhan)。隨著生(sheng)物工程(cheng)技術(shu)發展(zhan)，人(ren)工合(he)成Oligo DNA的(de)(de)需求量越來越大，已經成為(wei)(wei)分(fen)子生(sheng)物學(xue)實(shi)驗中(zhong)基礎的(de)(de)試(shi)劑(ji)之一。而合(he)成Oligo DNA的(de)(de)質(zhi)(zhi)量，將會直接影響科研人(ren)員實(shi)驗計劃的(de)(de)順(shun)利進(jin)行。因此， 使用高質(zhi)(zhi)量的(de)(de)合(he)成Oligo DNA制品變得(de)尤為(wei)(wei)重要。
引物合成Oligo DNA制品有如下特點(dian)：
1、合成高質量的(de)DNA制(zhi)品。
2、推出(chu)脫(tuo)鹽純化、PAGE純化、HPLC純化三(san)種級別(bie)制品，客戶可根(gen)據實驗需要(yao)選擇。我們對每(mei)個制品都進(jin)行(xing)嚴格的質(zhi)量管理。
3、制品包裝中附有制品相關的多種(zhong)數(shu)(shu)據，包括：合(he)成的原(yuan)始數(shu)(shu)據，A、G、C、T各堿基的分布(bu)情況，分子量，OD數(shu)(shu)，nmol數(shu)(shu)等，使用方便(bian)。
引物(wu)(wu)合成(cheng)現在(zai)一般(ban)都采用(yong)(yong)亞磷(lin)酰胺化學合成(cheng)Oligo DNA片段，具(ju)有快速偶(ou)聯以及(ji)起始(shi)反應物(wu)(wu)比較穩定的(de)(de)(de)特(te)點。該方法是在(zai)固(gu)相(xiang)載體(ti)上完成(cheng)DNA鏈(lian)的(de)(de)(de)合成(cheng)的(de)(de)(de)，合成(cheng)時從3"→5"方向進行，通常3"端的(de)(de)(de)第一個堿基結合在(zai)Glass擔體(ti)（Controlled Pore Glass，CPG）上。Oligo DNA合成(cheng)的(de)(de)(de)原理基本相(xiang)同，主要差別在(zai)于合成(cheng)產率(lv)的(de)(de)(de)高低、試劑消耗(hao)量(liang)和單個循環用(yong)(yong)時的(de)(de)(de)不(bu)同。我公司(si)采用(yong)(yong)的(de)(de)(de)合成(cheng)儀(yi)主要機型為(wei)ABI3900高通量(liang)合成(cheng)儀(yi)。
合成的詳細過程(cheng)見圖1，現簡要說(shuo)明(ming)如下：
圖1 Oligo DNA合成原理圖。N1代表第一個堿基，N2代表第二個堿基，依次類推。
| 第(di)一步 | 三氯乙酸和預先連接(jie)在固(gu)相載體（CPG）上(shang)的(de)(de)第一個核苷(gan)酸反應(ying)（其(qi)活性基團(tuan)處于被保護狀(zhuang)態），脫(tuo)去核苷(gan)酸5‘-羥基的(de)(de)保護基團(tuan)DMT，獲得游離(li)的(de)(de)5‘-羥基； |
| 第二步 | 活化(hua)新(xin)的堿(jian)基(ji)單體(ti)（Phosphoramidite)，準備與第一(yi)個(ge)堿(jian)基(ji)進行(xing)反應； |
| 第三步 | 合成DNA的原料（亞磷酰胺保護的核苷(gan)酸(suan)單體）與活(huo)(huo)化劑四氮唑混合，得到核苷(gan)亞磷酸(suan)活(huo)(huo)化中間體，它的3‘端被活(huo)(huo)化，5‘-羥(qian)基仍(reng)然被DMT保護，與溶液中游(you)離(li)的5‘-羥(qian)基發生縮合反應； |
| 第(di)四(si)步(bu) | 帶(dai)帽(capping)反應(ying)，縮合反應(ying)中可能有(you)少數5‘-羥基沒有(you)參加反應(ying)(少于(yu)2%)，用(yong)乙酸酐和1-甲基咪唑終(zhong)止其后(hou)繼續發(fa)生反應(ying)，這種短片段可以(yi)在純化時(shi)分離(li)掉(diao)； |
| 第五(wu)步 | 在(zai)氧化(hua)劑碘的(de)(de)作用下，亞磷(lin)酰形(xing)式轉變為更(geng)穩定的(de)(de)磷(lin)酸(suan)三(san)酯。（即將(jiang)三(san)價(jia)磷(lin)氧化(hua)成五價(jia)磷(lin)) （重(zhong)復進行Step1～Step5的(de)(de)循(xun)環，直至合(he)成完所需的(de)(de)Oligo DNA序(xu)列(lie)） |
| 第六步 | 合成結束(shu)后(hou)，將Oligo DNA分(fen)子(zi)從CPG上(shang)切(qie)下，再進(jin)行進(jin)一步的純化。 |
引物合(he)成過程中(zhong)可(ke)以觀察TCA處理階(jie)段的顏(yan)色(se)判定(ding)(ding)合(he)成效(xiao)率。連接在CPG上的引物被(bei)切(qie)下來(lai)，通過, PAGE等(deng)手(shou)段純(chun)化引物，成品引物用C18濃(nong)縮、脫鹽，測(ce)定(ding)(ding)OD260定(ding)(ding)量，根(gen)據訂單要求分裝。
（一）常規合(he)成(cheng)（≤60bp）
片(pian)段長度 | 純化方式 | 規(gui)格 | 單(dan)價(元/堿(jian)基) | 發貨周期(工作日) |
15－40bp | OPC | 2-5 OD | ￥1.20 | 2 |
10 OD | ￥1.80 | 2 | ||
30 OD | ￥4.00 | 3 | ||
50 OD | ￥8.00 | 3 | ||
15-60bp | PAGE | 2 OD | ￥1.60 | 3 |
5 OD | ￥1.80 | 3 | ||
10 OD | ￥2.20 | 3 |
（二）長鏈合成（>60bp）
片段長度 | 純(chun)化方式 | 規格 | 單(dan)價(元/堿基) | 發貨周期(工(gong)作日) |
61－80bp | PAGE | 2 OD | ￥4.00 | 3 |
5 OD | ￥6.50 | 3 | ||
10 OD | ￥8.00 | 3 | ||
81-100bp | PAGE | 1 OD | ￥8.00 | 3 |
（三）硫(liu)代修飾(SPO3)
產量(OD) | 發(fa)貨時間(工作(zuo)日) | 純化方(fang)式 | 單價(￥) |
2 | 4 | PAGE | 8.00/base |
5 | 4 | PAGE | 12.00/base |
10 | 4 | PAGE | 15.00/base |
30以上(shang) | 待詢(xun) | PAGE | 詢價 |
（四）特殊堿基
種類 | 產量（OD) | 發貨時間 | 純化方式 | 單價(jia)（元(yuan)/堿(jian)基） |
dＩ | 2 | 4 | PAGE | 80 |
5 | 4 | PAGE | 120 | |
dＵ | 2 | 4 | PAGE | 100 |
5 | 4 | PAGE | 140 | |
5甲基化dＣ | 2 | 4 | PAGE | 300 |
5溴dＵ | 2 | 4 | PAGE | 300 |
（五）修飾/標記引物
分類 | 修飾/標記 | 純化方式 | 2 OD | 5 OD | 10 OD |
磷(lin)酸基團(tuan)(Phosphorylation) | 5" PO4 | HPLC | ￥200.00 | ￥300.00 | ￥400.00 |
3" PO4 | HPLC | ￥300.00 | ￥350.00 | ￥500.00 | |
NH2修飾(Amino Linkers) | 5" or 3" NH2 C3 | HPLC | ￥450.00 | 詢價 | 詢價 |
5" NH2 C6 | HPLC | ￥200.00 | ￥300.00 | ￥450.00 | |
3" NH2 C7 | HPLC | ￥200.00 | ￥300.00 | ￥450.00 | |
5" NH2 C12 | HPLC | ￥450.00 | ￥600.00 | ￥800.00 | |
5" NH2 C6 dT | HPLC | ￥500.00 | ￥700.00 | ￥1,000.00 | |
3" NH2 C6 dT | HPLC | ￥350.00 | ￥500.00 | ￥800.00 | |
SH 修飾 (Thiolation) | 3" SH C3 | HPLC | ￥350.00 | ￥480.00 | ￥600.00 |
5" SH C6 | HPLC | ￥400.00 | ￥500.00 | ￥800.00 | |
Spacers | Spacer C3 | HPLC | ￥280.00 | ￥350.00 | ￥500.00 |
Spacer C6 | HPLC | ￥280.00 | ￥350.00 | ￥500.00 | |
Spacer 9 | HPLC | ￥280.00 | ￥350.00 | ￥500.00 | |
Spacer 18 | HPLC | ￥400.00 | ￥500.00 | ￥800.00 | |
dSpacer | HPLC | ￥500.00 | ￥700.00 | ￥1,000.00 | |
生物(wu)素(Biotin) | 5" Biotin | HPLC | ￥300.00 | ￥350.00 | ￥500.00 |
3" Biotin | HPLC | ￥350.00 | ￥400.00 | ￥600.00 | |
5" Biotin TEG | HPLC | ￥700.00 | 詢(xun)價 | 詢價(jia) | |
3" Biotin TEG | HPLC | ￥600.00 | 詢價 | 詢價(jia) | |
5" Dual Biotin | HPLC | ￥1,800.00 | 詢價 | 詢價 | |
5" or Internal Biotin dT | HPLC | ￥700.00 | ￥900.00 | ￥1,500.00 | |
5" PC Biotin | HPLC | ￥1,800.00 | 詢(xun)價 | 詢價 | |
地(di)高辛(Digoxin) | 5" or 3" Digoxin | HPLC | ￥600.00 | ￥800.00 | ￥1,200.00 |
熒光基團(tuan)(Fluorophores) | 5" Cy3 | HPLC | ￥1,200.00 | ￥1,500.00 | ￥2,500.00 |
3" Cy3 | HPLC | ￥1,300.00 | ￥1,600.00 | ￥2,600.00 | |
Internal Cy3 | HPLC | ￥1,400.00 | 詢價 | 詢價 | |
5" Cy5 | HPLC | ￥1,100.00 | ￥1,500.00 | ￥2,500.00 | |
3" Cy5 | HPLC | ￥1,000.00 | ￥1,800.00 | ￥2,600.00 | |
Internal Cy5 | HPLC | ￥1,400.00 | 詢價(jia) | 詢價 | |
5" FAM | HPLC | ￥280.00 | ￥320.00 | ￥450.00 | |
3" FAM | HPLC | ￥300.00 | ￥350.00 | ￥500.00 | |
5" HEX | HPLC | ￥450.00 | ￥600.00 | ￥900.00 | |
5" TET | HPLC | ￥450.00 | ￥600.00 | ￥900.00 | |
5" 6-JOE | HPLC | ￥550.00 | ￥650.00 | ￥900.00 | |
3" 6-JOE | HPLC | ￥550.00 | ￥700.00 | ￥1,000.00 | |
5" Rox | HPLC | ￥500.00 | ￥600.00 | ￥900.00 | |
3" Rox | HPLC | ￥550.00 | ￥700.00 | ￥1000.00 | |
5" TAMRA | HPLC | ￥450.00 | ￥600.00 | ￥850.00 | |
3" TAMRA | HPLC | ￥500.00 | ￥650.00 | ￥950.00 | |
5" FITC | HPLC | ￥300.00 | |||
3" FITC | HPLC | ￥350.00 | |||
Internal TAMRA | HPLC | ￥1000.00 | 詢(xun)價 | 詢價 | |
淬滅基團(Quenchers) | 3" DABCYL | HPLC | ￥750.00 | ￥900.00 | ￥1,200.00 |
3" BHQ 1 | HPLC | ￥600.00 | ￥800.00 | ￥1,100.00 | |
3" BHQ 2 | HPLC | ￥600.00 | ￥800.00 | ￥1,100.00 | |
電化學標(biao)記(Electrochemicals) | Ferrocene | HPLC | ￥550.00 | ￥700.00 | ￥1,000.00 |
其它 | 電詢 | ||||
（六）雙標(biao)記熒光探針
分類 | 標記 | 純(chun)化方式 | 2 OD | 5 OD | 10 OD |
3" TAMRA | 5" FAM-3" TAMRA | 2次HPLC純(chun)化 | ￥1,000.00 | ￥1,200.00 | ￥1,800.00 |
5" HEX-3" TAMRA | 2次HPLC純化(hua) | ￥1,400.00 | ￥1,600.00 | ￥2,000.00 | |
5" TET-3" TAMRA | 2次(ci)HPLC純化 | ￥1,400.00 | ￥1,600.00 | ￥2,000.00 | |
5" JOE-3" TAMRA | 2次HPLC純化 | ￥1,400.00 | 詢(xun)價 | 詢價(jia) | |
3" DABCYL | 5" FAM-3" DABCYL | HPLC | ￥1,000.00 | ￥1,200.00 | ￥1,800.00 |
5" HEX-3" DABCYL | HPLC | ￥1,200.00 | ￥1,400.00 | ￥2,000.00 | |
5" TET-3" DABCYL | HPLC | ￥1,200.00 | ￥1,400.00 | ￥2,000.00 | |
5" JOE-3" DABCYL | HPLC | ￥1,300.00 | 詢(xun)價 | 詢(xun)價 | |
5" TAMRA-3" DABCYL | HPLC | ￥1,400.00 | 詢價 | 詢價 | |
5" Cy5-3" DABCYL | HPLC | ￥1,300.00 | ￥1,600.00 | ￥2,000.00 | |
3" BHQ1 | 5" FAM-3" BHQ1 | HPLC | ￥1,000.00 | ￥1,200.00 | ￥1,450.00 |
5" HEX-3" BHQ1 | HPLC | ￥1,200.00 | ￥1,400.00 | ￥1,800.00 | |
5" JOE-3" BHQ1 | HPLC | ￥1,100.00 | 詢價(jia) | 詢價 | |
BHQ2 | 5" ROX-3" BHQ2 | HPLC | ￥1,000.00 | ￥1,300.00 | ￥1,800.00 |
ECLIPSE | 5" FAM-3" ECLIPSE | HPLC | ￥1,000.00 | ￥1,200.00 | ￥1,800.00 |
5" HEX-3" ECLIPSE | HPLC | ￥1,000.00 | 詢價 | 詢(xun)價 | |
5" TET-3" ECLIPSE | HPLC | ￥1,200.00 | 詢價 | 詢價 | |
5" JOE-3" ECLIPSE | HPLC | ￥1,100.00 | 詢價 | 詢價 | |
5" TAMRA-3" ECLIPSE | HPLC | ￥900.00 | ￥1,200.00 | ￥1,800.00 | |
5" Rox-3" ECLIPSE | HPLC | ￥900.00 | ￥1,200.00 | ￥1,800.00 | |
其它 | 電詢 | ||||
（七(qi)）、簡并堿基及代碼
| 簡并代(dai)碼 | M | R | W | S | Y | K | V | H | D | B | N |
| 代表堿基 | A/C | A/G | A/T | C/G | C/T | G/T | A/C/G | A/C/T | A/G/T | C/G/T | A/C/G/T |
* 價格可能會隨市場有所波動，歡迎咨詢(xun)當地銷售!
