甲(jia)基化BSP介紹:
DNA甲(jia)基(ji)(ji)(ji)化是(shi)較早發現的(de)(de)修飾(shi)途徑之一,真核(he)生物(wu)中甲(jia)基(ji)(ji)(ji)化發生于胞(bao)(bao)嘧(mi)(mi)啶(ding),即在DNA甲(jia)基(ji)(ji)(ji)化轉(zhuan)(zhuan)移(yi)酶(DNMTs)的(de)(de)作用下(xia)的(de)(de)CpG二核(he)苷酸5’端的(de)(de)胞(bao)(bao)嘧(mi)(mi)啶(ding)轉(zhuan)(zhuan)變(bian)為5’-甲(jia)基(ji)(ji)(ji)胞(bao)(bao)嘧(mi)(mi)啶(ding)。大量研(yan)究表明,DNA甲(jia)基(ji)(ji)(ji)化能引起染色質結構(gou)(gou)、DNA構(gou)(gou)象、DNA穩(wen)定性及DNA與蛋白(bai)質相互作用方(fang)式的(de)(de)改變(bian),從而控制(zhi)基(ji)(ji)(ji)因表達。DNA甲(jia)基(ji)(ji)(ji)化通常抑(yi)制(zhi)基(ji)(ji)(ji)因表達,去(qu)甲(jia)基(ji)(ji)(ji)化則誘導了基(ji)(ji)(ji)因重新(xin)活(huo)化和(he)表達,這(zhe)種DNA修飾(shi)方(fang)式在不(bu)改變(bian)基(ji)(ji)(ji)因序列的(de)(de)前提下(xia)實(shi)現對基(ji)(ji)(ji)因表達的(de)(de)調控。BSP(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)克隆測序法,是(shi)目前甲(jia)基(ji)(ji)(ji)化檢(jian)測的(de)(de)通用方(fang)法。
甲基化BSP實(shi)驗(yan)原理:
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,未發生甲基化(hua)(hua)的(de)胞嘧(mi)啶(ding)被(bei)轉化(hua)(hua)為(wei)尿(niao)嘧(mi)啶(ding),而甲基化(hua)(hua)的(de)胞嘧(mi)啶(ding)不變;隨后(hou)再CpG島兩端(duan)設計(ji)引物(wu)進行(xing)PCR,將目的(de)產物(wu)純化(hua)(hua)后(hou)進行(xing)TA克(ke)隆,每(mei)個(ge)克(ke)隆挑取(qu)陽性克(ke)隆測序(xu),最后(hou)將測得的(de)序(xu)列(lie)(lie)與原始序(xu)列(lie)(lie)比對,統計(ji)甲基化(hua)(hua)位點及(ji)數量,并分(fen)析甲基化(hua)(hua)程度(du)。
基于重亞硫酸鹽轉化的甲基化分析原(yuan)理
甲(jia)基化服務特點:
1、克服了MSP只能作定性研究,可做(zuo)定量研究;
2、敏感(gan)性高,待(dai)測DNA中(zhong)5-甲基胞(bao)嘧啶(ding)分布不(bu)均衡(heng)也可檢測;
3、只要客(ke)戶提(ti)供基因名稱(cheng)或序列,我們免費設計引物;
4、周期快:2周出結果。