一.DNA克隆簡介

DNA克(ke)隆是基因工程研究(jiu)中(zhong)基本的操作之(zhi)一。簡單地講，就是將(jiang)外(wai)源基因與(yu)克(ke)隆載(zai)體進行體外(wai)連接(jie)，然(ran)后再(zai)轉化(hua)到宿主菌中(zhong)進行克(ke)隆、篩選，以此獲得(de)質粒重組體。 

二.服務要求

1. 提供(gong)外源(yuan)DNA的來源(yuan)及背(bei)景(jing)資料。DNA來源(yuan)包括：PCR擴增(zeng)產物，RT-PCR擴增(zeng)產物，從(cong)其他質粒上酶切得到的DNA片段等。 

2. 如DNA為PCR產(chan)物(wu)，請提供DNA片段的電泳照片，并請標明Marker及其濃度(du)。  

3. 注明克隆使用(yong)的酶(mei)切(qie)位點(dian)。 

4. 如果為商(shang)品化(hua)載體，請提供生(sheng)產廠家及標準名(ming)稱(cheng)，如果所(suo)提供載體是您構(gou)建的，請注明多克(ke)隆位點、抗性、分子量(liang)等資料。 

5. 實驗中(zhong)使用氨芐、青霉(mei)素(su)、卡那霉(mei)素(su)、四環素(su)以外的抗生素(su)時，抗生素(su)需您提供(gong)。 

6. 您自己提供的引物如(ru)果為干品，請標明(ming)具(ju)體(ti)的OD數，如(ru)果為液體(ti)狀態(tai)，請標明(ming)具(ju)體(ti)濃度(du)。 

三.操作程序

1. 通(tong)過(guo)代理商(shang)或直接和公(gong)司聯系(xi)，同(tong)時提供詳(xiang)細(xi)的背景資(zi)料，實(shi)驗(yan)要求(qiu)等。代理商(shang)或公(gong)司經過(guo)研討后(hou)將(jiang)和您取得聯系(xi)，協商(shang)確定實(shi)驗(yan)方案，并告知(zhi)您具體的服(fu)務價格，我們將(jiang)簽訂(ding)合同(tong)，在收到您試驗(yan)材料后(hou)，立即開始(shi)實(shi)驗(yan)。 

2. 如果您需要我(wo)們(men)進行PCR擴增時，我(wo)們(men)會采用DNA聚合(he)酶進行PCR反應(ying)。

3. 如果(guo)克隆后的(de)(de)質(zhi)粒需(xu)要測序反應，請將(jiang)標準參考序列的(de)(de)電子(zi)版資料(liao)提供給我(wo)們。 

4. 在完成DNA克隆(long)和測序等工作后，我(wo)們將為您提供一套完整(zheng)的(de)實驗結果(guo)，其中包括：實驗操作說明、引物、克隆(long)構建的(de)質粒(li)及含(han)該質粒(li)的(de)菌(jun)體(ti)（穿刺菌(jun)）、測序結果(guo)堿(jian)基序列圖和測序彩色峰形圖。 

5. 一般情(qing)況下普通載體(ti)的克隆(long)需10天(tian)左右時間(jian)。

四.收費標準

1. 普通載體（如pUC系(xi)(xi)列(lie)、pBluescript ll系(xi)(xi)列(lie)、T載體系(xi)(xi)列(lie)、pGEM系(xi)(xi)列(lie)等）與其他特殊載體（如pET系(xi)(xi)列(lie)、pGEX系(xi)(xi)列(lie)、pLNCX 系(xi)(xi)列(lie)、pQE系(xi)(xi)列(lie)、pBR系(xi)(xi)列(lie)等）在克隆(long)時難易(yi)程(cheng)度相(xiang)差(cha)很大(da)，不同的DNA片段(duan)(duan)的克隆(long)情況(kuang)也各不相(xiang)同，因此DNA片段(duan)(duan)的克隆(long)服務收費標準不一樣。一般(ban)來說，單就克隆(long)操作(zuo)這一步驟而言的收費標準在600～1500之間，具(ju)體情況(kuang)請(qing)詢價(jia)。  

2. 多表達框、多拷貝數質粒構建過程相對復(fu)雜，具體收(shou)費標準請與公司基因工程師直(zhi)接(jie)談。

五.克隆服務的種類

1、PCR產物的(de)TA克隆。 

2、PCR產物克隆到(dao)非T載體。

3、注明(ming)克隆(long)使用的酶切位點(dian)以及是否需(xu)要(yao)平(ping)端連接等(deng)。

4、各種載體(ti)中元(yuan)件的修(xiu)改。

5、原核、真核表達(da)載體(ti)的構建(jian)。