2024-05-17
PART.01、坐骨(gu)神經結(jie)構簡(jian)介
坐(zuo)骨(gu)神(shen)經是動物全身最(zui)長最(zui)粗大的(de)(de)神(shen)經，在腘窩(wo)分(fen)為內側(ce)的(de)(de)脛神(shen)經和外側(ce)的(de)(de)腓總神(shen)經。自梨狀肌下孔(kong)出骨(gu)盆后，其總干和終支延伸在整個(ge)下肢背(bei)側(ce)。總干位于(yu)臀(tun)大肌深面(mian)，經股(gu)(gu)骨(gu)大轉子(zi)和坐(zuo)骨(gu)結節之間(jian)，下降至(zhi)(zhi)股(gu)(gu)骨(gu)背(bei)側(ce)，分(fen)支至(zhi)(zhi)大腿(tui)背(bei)側(ce)肌群。
坐骨神(shen)經既是股后群肌(ji)、小腿和足肌(ji)的(de)運動神(shen)經，也(ye)是小腿和足的(de)重(zhong)要感覺神(shen)經。接下來小派為大(da)家分享實驗方案并展示結(jie)果。
PART.02、小鼠坐骨(gu)神經解離方案
小鼠坐骨神經
1、實驗試劑配置(zhi)
（1）適當體積復合酶液
（2）含2% FBS的DPBS，冰(bing)上預(yu)冷(leng)
（3）完全(quan)培養(yang)基：含(han)10% FBS的DMEM，冰(bing)上預(yu)冷(leng)
2、預處理
從組(zu)織(zhi)保存液中(zhong)取(qu)出組(zu)織(zhi)樣本，放入預冷的 DPBS中(zhong)清洗一到兩(liang)遍(bian)，轉移至少量復(fu)合酶液中(zhong)，使用(yong)眼科剪(jian)將組(zu)織(zhi)盡(jin)可(ke)能剪(jian)碎。
3、組織消化(hua)
補充酶液(ye)至一定體(ti)積(ji)，置(zhi)于37℃水浴中振蕩消化(hua)10-15min，用巴氏吸(xi)管反復(fu)吹打多次后觀察組織，若仍(reng)有剩余則繼續(xu)消化(hua)5-10min，直至組織完全(quan)消化(hua)，加(jia)入(ru)等體(ti)積(ji)的完全(quan)培養基終止消化(hua)，過30um細胞篩收(shou)集(ji)懸液(ye)。
4、裂紅
將細胞懸液4℃ 500×g 離心5 min，棄(qi)上清，加入2-3mL 體積的(de)1X RBC，室(shi)溫放置2min，加入適量(liang)DPBS（含2%FBS）終止，4℃ 500×g 離心5 min。
5、清(qing)洗
離(li)心(xin)后(hou)棄上(shang)清(qing)，加入3mL DPBS（含(han)2%FBS）重懸(xuan)沉淀，4℃ 500×g 離(li)心(xin)5 min。棄上(shang)清(qing)，用適量(liang)DPBS(含(han)2% FBS)重懸(xuan)細胞，進行熒光計數及臺盼藍鏡檢，調整濃度至(zhi)700-1200cells/ul后(hou)上(shang)機。
（若(ruo)離心(xin)重懸后出現(xian)活(huo)率不足80%，需要進(jin)行(xing)去(qu)除死(si)細胞(bao)處(chu)理。若(ruo)出現(xian)碎片較多，則(ze)需要進(jin)行(xing)去(qu)碎片操(cao)作。）
PART.03、結果展示
活(huo)性、濃(nong)度檢測
92%活率，濃度600 cells/ul，總量5W左右。
鏡檢結(jie)果(guo)
懸液背景干凈，無明顯雜質
數據質控
上圖是下機數(shu)據cellranger質控結果，細胞捕獲數(shu)及基因數(shu)都(dou)符(fu)合前期需求。
