2024-07-01
高通量qPCR芯(xin)片(pian)極速周期
只需15個工作(zuo)日! 即可完成一(yi)張芯片5184個納升級(ji)qPCR反應!
產品介(jie)紹 實(shi)時熒(ying)光(guang)(guang)定(ding)量PCR(Quantitative real-time PCR)是20世紀90年代發展起來的一種(zhong)準確、快速的核酸定(ding)量分(fen)析技術,通(tong)過(guo)在PCR反(fan)應體系(xi)中引入一種(zhong)熒(ying)光(guang)(guang)化(hua)學物質,對PCR擴增(zeng)(zeng)反(fan)應中每一個循環產物的熒(ying)光(guang)(guang)信(xin)號進行實(shi)時檢測,得到一條熒(ying)光(guang)(guang)擴增(zeng)(zeng)曲線圖(tu),以此(ci)實(shi)驗對初始(shi)模板的定(ding)量分(fen)析。 高(gao)(gao)(gao)(gao)通量(liang)(liang)qPCR技(ji)(ji)術(shu)是對傳統(tong)(tong)qPCR技(ji)(ji)術(shu)的(de)一次突(tu)破(po)性升級(ji)。高(gao)(gao)(gao)(gao)通量(liang)(liang)qPCR技(ji)(ji)術(shu)將(jiang)針(zhen)對目的(de)基因設計(ji)的(de)對應(ying)qPCR引物包(bao)裝至薄(bo)層金屬合金納米(mi)孔芯(xin)片得(de)到(dao)高(gao)(gao)(gao)(gao)通量(liang)(liang)qPCR芯(xin)片,通過SmartChip超(chao)高(gao)(gao)(gao)(gao)通量(liang)(liang)熒光定量(liang)(liang)PCR系統(tong)(tong)完成。該系統(tong)(tong)每次能夠并行5184個納升級(ji)qPCR反應(ying),可(ke)對多個樣本進(jin)行高(gao)(gao)(gao)(gao)通量(liang)(liang)、高(gao)(gao)(gao)(gao)效(xiao)性、高(gao)(gao)(gao)(gao)精確性和(he)高(gao)(gao)(gao)(gao)靈敏度(du)的(de)目的(de)基因檢測(ce)和(he)定量(liang)(liang),規避了傳統(tong)(tong)qPCR方(fang)法的(de)基因檢測(ce)單一、費用成本高(gao)(gao)(gao)(gao)和(he)效(xiao)率(lv)低等缺點。
絕(jue)對(dui)定(ding)量芯片(pian)——針(zhen)對(dui)微生物(wu)群(qun)體(ti)樣本(ben) 絕對(dui)定(ding)量(liang)芯(xin)(xin)片(pian)(pian)主(zhu)要針對(dui)微生物群(qun)體樣本(ben),包(bao)括抗生素抗性(xing)基因芯(xin)(xin)片(pian)(pian)、重(zhong)金屬抗性(xing)基因芯(xin)(xin)片(pian)(pian)、微生物功(gong)能(neng)基因芯(xin)(xin)片(pian)(pian)等(deng)。針對(dui)群(qun)體樣本(ben)中的細菌與古菌,以16S rRNA作為(wei)內(nei)參,使(shi)用SmartChip超高(gao)通量(liang)熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR系統(tong),可以快速(su)對(dui)大批量(liang)樣本(ben)的特定(ding)研(yan)究方向的相關基因進(jin)行高(gao)效準確的基因定(ding)量(liang)。 相對豐度計算 以(yi)16S rRNA作為(wei)內參,參照(zhao)以(yi)下公式進行數據(ju)計算: (1) 相對拷(kao)貝數=10^(31-Ct)/(10/3) (2) 基因(yin)相(xiang)對豐度(du)=基因(yin)相(xiang)對拷(kao)(kao)貝(bei)數(shu)/16S rRNA相(xiang)對拷(kao)(kao)貝(bei)數(shu) (3) 對Ct值數(shu)據進(jin)行標準化,得到各基(ji)因(yin)在(zai)各樣本(ben)中的相對豐度信息。 絕(jue)對豐度計算 使用(yong)16S 擴增(zeng)的PCR產物構建標(biao)準質粒。使用(yong)Roche儀器進行qPCR檢測,制(zhi)作標(biao)準曲線。代(dai)入各樣品對應的16S rRNA Ct值數據,對各樣品的16s rRNA基(ji)因(yin)進行絕對定量(liang)(liang)。通過公式:16SrRNA相對豐度/16S rRNA絕對定量(liang)(liang)=基(ji)因(yin)相對豐度/基(ji)因(yin)絕對定量(liang)(liang),換算即可獲(huo)得其他基(ji)因(yin)的絕對定量(liang)(liang)信息。 實驗流程(cheng) 生信分(fen)析流程 生信分析(xi)流程(cheng)
相(xiang)對(dui)定量芯(xin)片——定量差(cha)異表達基因 相(xiang)對定(ding)量(liang)芯(xin)片主要定(ding)量(liang)不同個體樣本中的(de)(de)差(cha)異表達基因。選擇(ze)合適的(de)(de)內參基因,使用SmartChip超高通量(liang)熒光定(ding)量(liang)PCR系統,可以快速對大批(pi)量(liang)樣本的(de)(de)大量(liang)基因進行高效準確的(de)(de)相(xiang)對定(ding)量(liang)。 采用 2-△△Ct 分析(xi)方法,比較基因的差(cha)異表達水(shui)平 (1)內(nei)參基因均(jun)一化樣本差異(yi) △Ct=Ct 目的基因(yin)-Ct 內參(can)基因(yin) (2)其他(ta)樣本和對照本比較(jiao) △△Ct=△Ct 實驗組-△Ct 對照組。 (3)基(ji)因(yin)差異表達水(shui)平計算(suan) 使用2-△△Ct 公式計算基因(yin)表(biao)達水平差異 實驗流程 由于(yu)(yu)做相對(dui)(dui)定(ding)量芯(xin)片(pian)的引(yin)物和(he)樣本(ben)種類較復雜,我(wo)們一(yi)般在引(yin)物合成后(hou)(hou),使用常規qPCR儀器將隨機部(bu)分樣本(ben)混樣進行(xing)預(yu)實驗(yan),確(que)認引(yin)物的特異性與CT值,并確(que)定(ding)上(shang)機程序。預(yu)實驗(yan)正常后(hou)(hou),進行(xing)芯(xin)片(pian)上(shang)機。相對(dui)(dui)定(ding)量芯(xin)片(pian)的數(shu)據為(wei)不同(tong)樣本(ben)基(ji)因相對(dui)(dui)于(yu)(yu)對(dui)(dui)照組的表達量差異倍數(shu),后(hou)(hou)續可根據需求制(zhi)作(zuo)相對(dui)(dui)定(ding)量熱圖、柱狀(zhuang)圖等。 通過(guo)高通量(liang)qPCR系統(tong),不論是群體樣本絕對(dui)定量(liang),還是個(ge)體樣本相對(dui)定量(liang),都(dou)可(ke)以在短時間內對(dui)大批量(liang)樣本的大量(liang)基(ji)因(yin)進行高效準(zhun)確的定量(liang)! 高通量qPCR芯(xin)片急速周期,只(zhi)需(xu)15個工作日,即可完成(cheng)一張芯(xin)片5184個納(na)升級qPCR反應!更(geng)(geng)短的周期!更(geng)(geng)低(di)的成(cheng)本!更(geng)(geng)完美的體驗(yan)!基因豐(feng)度唾(tuo)手可得! 心(xin)動(dong)不如行動(dong),趕(gan)快行動(dong)起來吧!
基因工程產品目錄 基因(yin)定(ding)量服(fu)務(wu) 高通量(liang)(liang)(liang)qPCR芯片、常規相對定(ding)量(liang)(liang)(liang)(mRNA,microRNA,lncRNA,circRNA,外泌體定(ding)量(liang)(liang)(liang)等)、常規絕對定(ding)量(liang)(liang)(liang)(微生(sheng)物多樣性(xing)、功(gong)能基因) SNP分(fen)型服務(wu) Kasp法(fa)、Sanger測(ce)序法(fa)、SNaPshot法(fa) PCR重測序服務 物種鑒定、目(mu)的(de)基(ji)因擴增測(ce)序(xu)、PCR產物測(ce)序(xu) 基礎分子生物學服(fu)務 引物合成、標記探(tan)針引物合成、一代測序、PCR擴(kuo)增 表觀遺(yi)傳研究 甲基化BSP檢測 毛細管電泳分型(xing)服務 SSR引物(wu)開發、微衛(wei)星多態性(xing)分析、MSI檢(jian)測(ce)、STR跑板(ban)、細(xi)胞(bao)系鑒定 分子克隆服務(wu) 全(quan)基因合成、PCR克隆、TA克隆、定(ding)點突變、RNA合成 蛋白互作驗證服務 核(he)體系(xi)酵母單雜(za)/雙(shuang)雜(za)、膜(mo)體系(xi)酵母雙(shuang)雜(za)、點對點驗(yan)證(zheng) 蛋白測定服務 酶聯免疫吸(xi)附(Elisa)