2025-01-10
01、引 言
在(zai)科研(yan)(yan)領(ling)域中(zhong),提(ti)(ti)(ti)取(qu)(qu)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)雖看似不(bu)那(nei)么起眼,但卻發揮著(zhu)關鍵作用。例如,酵(jiao)母(mu)提(ti)(ti)(ti)取(qu)(qu)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)盒(he)是(shi)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)科研(yan)(yan)中(zhong)提(ti)(ti)(ti)取(qu)(qu)酵(jiao)母(mu) DNA、研(yan)(yan)究酵(jiao)母(mu)基因(yin)組結構和(he)功能(neng)的(de)(de)(de)重(zhong)要工具,能(neng)極大(da)提(ti)(ti)(ti)高實驗效率,且提(ti)(ti)(ti)取(qu)(qu)的(de)(de)(de) DNA 質(zhi)量(liang)和(he)純度高,適用于后續多(duo)種實驗操作。總(zong) RNA 抽提(ti)(ti)(ti)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)盒(he)則(ze)是(shi)分(fen)子生(sheng)物(wu)(wu)(wu)學和(he)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)醫學研(yan)(yan)究中(zhong)不(bu)可或缺的(de)(de)(de)得力(li)助(zhu)手,其質(zhi)量(liang)直接影響后續實驗的(de)(de)(de)準(zhun)確性與可靠性,可助(zhu)力(li)基因(yin)表達分(fen)析、RNA 測序及(ji)疾病(bing)機理研(yan)(yan)究等,還能(neng)支持(chi)臨床診斷與治療。還有植(zhi)物(wu)(wu)(wu)核酸提(ti)(ti)(ti)取(qu)(qu)試(shi)劑(ji)(ji)(ji),可幫助(zhu)研(yan)(yan)究人員(yuan)從植(zhi)物(wu)(wu)(wu)樣品(pin)中(zhong)提(ti)(ti)(ti)取(qu)(qu)核酸,進而開展植(zhi)物(wu)(wu)(wu)學研(yan)(yan)究、農業領(ling)域的(de)(de)(de)病(bing)原體檢測以(yi)及(ji)食品(pin)安(an)全、環境(jing)監(jian)測等工作。外(wai)泌(mi)體提(ti)(ti)(ti)取(qu)(qu)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)盒(he)則(ze)為生(sheng)物(wu)(wu)(wu)醫學研(yan)(yan)究中(zhong)探索外(wai)泌(mi)體在(zai)疾病(bing)診斷和(he)治療中(zhong)的(de)(de)(de)潛力(li)提(ti)(ti)(ti)供了重(zhong)要方法。這些提(ti)(ti)(ti)取(qu)(qu)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)在(zai)不(bu)同的(de)(de)(de)場景中(zhong)應用自(zi)如,推動著(zhu)科研(yan)(yan)工作的(de)(de)(de)不(bu)斷前(qian)進。
02、常見提(ti)取試劑
(一)核酸(suan)提(ti)取試劑
核酸提取(qu)(qu)試(shi)劑是(shi)科研實(shi)驗(yan)中常用的(de)一類(lei)試(shi)劑,主要(yao)用于從生(sheng)物樣本(ben)中提取(qu)(qu) DNA 和 RNA,為后續的(de)分子(zi)生(sheng)物學(xue)實(shi)驗(yan)提供高(gao)質量的(de)核酸模板。
DNA 提(ti)取試劑的作用原理主要(yao)是(shi)通過細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye)破壞細(xi)胞(bao)膜和核膜,使 DNA 釋放(fang)到溶液(ye)中,然后利用蛋白酶(mei) K 等(deng)(deng)酶(mei)類降(jiang)解(jie)蛋白質(zhi),再通過酚氯(lv)仿抽提(ti)、乙醇沉淀(dian)等(deng)(deng)方(fang)法(fa)去(qu)除蛋白質(zhi)、多糖等(deng)(deng)雜質(zhi),最(zui)終得到純凈的 DNA。
RNA 提取試劑的(de)工作機制則是(shi)利用異(yi)硫氰酸胍等強變性(xing)(xing)劑迅速溶解(jie)蛋(dan)白質,抑制 RNase 的(de)活性(xing)(xing),同時使核蛋(dan)白與核酸分離,再通(tong)過(guo)離心柱(zhu)法(fa)(fa)或沉(chen)淀法(fa)(fa)等方法(fa)(fa)將 RNA 與其他雜(za)質分離。在基因表達研究中,需(xu)要(yao)從細胞樣本(ben)中提取 RNA,以(yi)分析基因的(de)轉錄水平。一(yi)些基于離心柱(zhu)的(de) RNA 提取試劑盒,能(neng)夠(gou)快速、高效地(di)提取出(chu)完整的(de) RNA,滿足實(shi)時熒(ying)光定量 PCR 等實(shi)驗的(de)要(yao)求。
不同類型的(de)(de)核(he)(he)(he)酸(suan)提取(qu)試(shi)劑各有特點和適(shi)用場(chang)景。傳統的(de)(de)酚氯(lv)仿法(fa)提取(qu)核(he)(he)(he)酸(suan),雖然操作較(jiao)(jiao)為繁瑣(suo),但對(dui)于(yu)一些復雜樣(yang)本(ben),如含有較(jiao)(jiao)多蛋(dan)白質(zhi)(zhi)和多糖的(de)(de)組織樣(yang)本(ben),能夠獲得較(jiao)(jiao)高的(de)(de)核(he)(he)(he)酸(suan)純度(du)和質(zhi)(zhi)量,適(shi)用于(yu)對(dui)核(he)(he)(he)酸(suan)純度(du)要求較(jiao)(jiao)高的(de)(de)實驗,如長片段 PCR、Southern blot 等。而基于(yu)磁珠法(fa)的(de)(de)核(he)(he)(he)酸(suan)提取(qu)試(shi)劑則具有操作簡(jian)便、自動化(hua)程度(du)高、提取(qu)效率快等優點,適(shi)用于(yu)大(da)規模樣(yang)本(ben)的(de)(de)核(he)(he)(he)酸(suan)提取(qu),如臨床診斷中的(de)(de)病毒核(he)(he)(he)酸(suan)檢測、高通量測序中的(de)(de)核(he)(he)(he)酸(suan)樣(yang)本(ben)制(zhi)備等。
(二)蛋白質提取試(shi)劑
蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)提(ti)取試(shi)劑旨在將細胞或組織(zhi)中的蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)溶解并分離出來,同(tong)時保持其(qi)天然構象和(he)生物活性(xing),為蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)的純化、鑒(jian)定和(he)功能研究提(ti)供基礎。
裂解液(ye)(ye)是蛋白質(zhi)提(ti)取(qu)中(zhong)常用的(de)試(shi)劑之一,其(qi)主要成分包(bao)括表面活性(xing)劑(如(ru) SDS、Triton X-100 等)、鹽類(如(ru) NaCl、KCl 等)和緩(huan)沖液(ye)(ye)(如(ru) Tris-HCl、HEPES 等)。表面活性(xing)劑能夠(gou)破壞(huai)細(xi)胞膜和細(xi)胞器膜,使蛋白質(zhi)釋(shi)放到溶(rong)液(ye)(ye)中(zhong);鹽類可以調(diao)節溶(rong)液(ye)(ye)的(de)離子(zi)強(qiang)度,促進蛋白質(zhi)的(de)溶(rong)解;緩(huan)沖液(ye)(ye)用于(yu)維持溶(rong)液(ye)(ye)的(de) pH 穩(wen)定,防止蛋白質(zhi)變性(xing)。
蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)酶抑制劑(ji)也是(shi)(shi)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質提取(qu)(qu)過(guo)程中(zhong)不可(ke)或(huo)缺的試劑(ji),其(qi)作用是(shi)(shi)抑制細胞內源性(xing)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)酶的活性(xing),防止蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質在提取(qu)(qu)過(guo)程中(zhong)被降解。常見的蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)酶抑制劑(ji)包(bao)括 PMSF、EDTA、leupeptin 等,它(ta)們(men)可(ke)以(yi)分別抑制絲氨酸(suan)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)酶、金屬(shu)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)酶、半胱(guang)氨酸(suan)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)酶等多種蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)酶的活性(xing)。在提取(qu)(qu)一些對蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)酶敏感的蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質時(shi),如某些激(ji)酶、磷(lin)酸(suan)酶等,添加蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)酶抑制劑(ji)尤為(wei)重要。
在選(xuan)擇蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)質(zhi)提(ti)取(qu)試劑時,需(xu)要根據蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)質(zhi)的(de)性(xing)(xing)質(zhi)進行合(he)理(li)選(xuan)擇。對于水溶(rong)性(xing)(xing)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)質(zhi),可以(yi)選(xuan)擇溫和的(de)裂(lie)解(jie)液,如 Tris-HCl 緩沖液加(jia)少量的(de)表(biao)面活性(xing)(xing)劑;對于膜(mo)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai),由于其(qi)(qi)與膜(mo)結(jie)(jie)構緊密結(jie)(jie)合(he),需(xu)要使用含有(you)較強表(biao)面活性(xing)(xing)劑(如 SDS)的(de)裂(lie)解(jie)液,或(huo)(huo)(huo)者采用專門的(de)膜(mo)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)提(ti)取(qu)試劑盒;對于一些(xie)與核(he)酸(suan)或(huo)(huo)(huo)其(qi)(qi)他生物(wu)大分子結(jie)(jie)合(he)的(de)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)質(zhi),則需(xu)要在提(ti)取(qu)過程中加(jia)入(ru)相(xiang)應的(de)核(he)酸(suan)酶或(huo)(huo)(huo)其(qi)(qi)他酶類(lei),以(yi)去除結(jie)(jie)合(he)的(de)雜質(zhi),保證蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)質(zhi)的(de)純度和活性(xing)(xing)。
(三)其他提取試劑
除了核(he)酸(suan)和蛋白(bai)質提(ti)取(qu)試劑(ji)(ji)外,還(huan)有一些(xie)針對其(qi)他生(sheng)物大分子(zi)的提(ti)取(qu)試劑(ji)(ji),如(ru)多糖提(ti)取(qu)試劑(ji)(ji)、脂質提(ti)取(qu)試劑(ji)(ji)等。
多糖提(ti)取(qu)試劑(ji)的種(zhong)類多樣(yang),常見的有水提(ti)法(fa)(fa)(fa)、酸提(ti)法(fa)(fa)(fa)、堿提(ti)法(fa)(fa)(fa)、酶提(ti)法(fa)(fa)(fa)、超聲(sheng)波輔助提(ti)取(qu)法(fa)(fa)(fa)、微(wei)波輔助提(ti)取(qu)法(fa)(fa)(fa)、高壓脈沖提(ti)取(qu)法(fa)(fa)(fa)和超臨界(jie)流體萃取(qu)法(fa)(fa)(fa)等。
在(zai)天(tian)然產物(wu)(wu)化(hua)學研(yan)究中,從植(zhi)物(wu)(wu)中提取(qu)(qu)多(duo)糖(tang),以研(yan)究其抗氧化(hua)、免疫調節(jie)等(deng)生(sheng)物(wu)(wu)活(huo)性,就需要根據(ju)植(zhi)物(wu)(wu)的(de)(de)種類和多(duo)糖(tang)的(de)(de)性質(zhi)選擇合適的(de)(de)提取(qu)(qu)試劑和方法,如對于一些細(xi)胞壁較厚(hou)的(de)(de)植(zhi)物(wu)(wu)材料(liao),可采用超聲波輔助(zhu)提取(qu)(qu)法或酶提法,以提高多(duo)糖(tang)的(de)(de)提取(qu)(qu)率。
脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)提取(qu)(qu)(qu)試(shi)(shi)劑(ji)(ji)主要(yao)利用脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)不溶于(yu)水、易溶于(yu)有(you)機溶劑(ji)(ji)的(de)特性(xing),常用的(de)有(you)機溶劑(ji)(ji)包括乙醇、乙醚、氯仿、甲醇等。例如,在細胞生物(wu)學研(yan)究中(zhong),需(xu)要(yao)提取(qu)(qu)(qu)細胞膜上的(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi),以(yi)分析其組成和(he)功能(neng),可(ke)(ke)使用氯仿甲醇混合(he)液進行提取(qu)(qu)(qu)。此外,還有(you)一些(xie)專門的(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)提取(qu)(qu)(qu)試(shi)(shi)劑(ji)(ji)盒,能(neng)夠更高效、更準確地提取(qu)(qu)(qu)和(he)分離不同(tong)類型的(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi),如甘油(you)三(san)酯、磷脂(zhi)(zhi)(zhi)、膽固醇等,為脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)代謝(xie)研(yan)究、藥物(wu)研(yan)發等提供(gong)有(you)力(li)支持。在研(yan)究心血管(guan)疾病與脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)代謝(xie)的(de)關系時,需(xu)要(yao)從血液樣本(ben)中(zhong)提取(qu)(qu)(qu)脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi),使用專門的(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)提取(qu)(qu)(qu)試(shi)(shi)劑(ji)(ji)可(ke)(ke)以(yi)確保提取(qu)(qu)(qu)的(de)脂(zhi)(zhi)(zhi)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)純度(du)和(he)完(wan)整性(xing),為后(hou)續的(de)分析檢測提供(gong)可(ke)(ke)靠的(de)樣本(ben)。
03、提取試劑在前沿科研(yan)中的應用(yong)領域
(一(yi))生(sheng)物醫藥領域
在新冠疫(yi)情(qing)期間(jian),通過使(shi)用專門(men)的(de)(de)(de)病毒核酸(suan)(suan)提(ti)(ti)取(qu)試(shi)劑,從患者(zhe)的(de)(de)(de)鼻咽拭子(zi)、痰液等樣本中(zhong)(zhong)高(gao)效地(di)(di)(di)提(ti)(ti)取(qu)出新冠病毒的(de)(de)(de)核酸(suan)(suan),為后續的(de)(de)(de)核酸(suan)(suan)檢(jian)(jian)測提(ti)(ti)供了高(gao)質量的(de)(de)(de)模板。這(zhe)些提(ti)(ti)取(qu)試(shi)劑能夠有(you)效地(di)(di)(di)去除樣本中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)雜質和(he)抑(yi)制(zhi)(zhi)劑,確(que)保核酸(suan)(suan)的(de)(de)(de)純度(du)和(he)完整性(xing),從而提(ti)(ti)高(gao)檢(jian)(jian)測的(de)(de)(de)準(zhun)確(que)性(xing)和(he)靈(ling)敏度(du)。基于核酸(suan)(suan)檢(jian)(jian)測的(de)(de)(de)結(jie)果,醫生可以快速、準(zhun)確(que)地(di)(di)(di)診斷患者(zhe)是否感染新冠病毒,及(ji)時采取(qu)隔離(li)和(he)治療措施,有(you)效地(di)(di)(di)控制(zhi)(zhi)疫(yi)情(qing)的(de)(de)(de)傳播。
疫(yi)苗(miao)研(yan)發過(guo)(guo)程中(zhong),例如,在(zai) mRNA 疫(yi)苗(miao)的(de)(de)研(yan)發中(zhong),需要從細胞中(zhong)提取(qu)(qu) mRNA,并(bing)對(dui)其進行純化(hua)和(he)(he)修(xiu)飾,以確保疫(yi)苗(miao)的(de)(de)安全(quan)性和(he)(he)有效性。此外(wai),在(zai)重組(zu)蛋白疫(yi)苗(miao)的(de)(de)研(yan)發中(zhong),蛋白質提取(qu)(qu)試劑則用(yong)于(yu)從表達系統中(zhong)提取(qu)(qu)和(he)(he)純化(hua)目標蛋白,這些蛋白經過(guo)(guo)加工和(he)(he)處(chu)理后,可作為疫(yi)苗(miao)的(de)(de)關(guan)鍵成(cheng)分(fen),激發人體的(de)(de)免疫(yi)反(fan)應,預防疾病(bing)的(de)(de)發生。
(二(er))食品安全檢(jian)測
在食品中農藥殘(can)留的(de)檢測(ce)(ce)方面(mian),提取(qu)試劑(ji)發揮著關鍵作用。氣相色(se)譜法是(shi)常用的(de)農藥殘(can)留檢測(ce)(ce)方法之一,根據檢測(ce)(ce)農藥的(de)類型,可(ke)選擇乙腈等提取(qu)試劑(ji),將(jiang)食品中的(de)農藥成分提取(qu)出來,然后(hou)通(tong)過(guo)色(se)譜柱(zhu)進行分離和(he)檢測(ce)(ce),能(neng)夠實現(xian)對食品中有機(ji)磷、有機(ji)氯等農藥殘(can)留的(de)大批量(liang)檢測(ce)(ce),確保食品中的(de)農藥殘(can)留量(liang)符合(he)國家(jia)標(biao)準(zhun),保障消費(fei)者的(de)健康。
對于食(shi)品中(zhong)的(de)(de)(de)(de)微(wei)生(sheng)物(wu)污染(ran)(ran)檢(jian)測(ce),提(ti)取(qu)試劑同樣(yang)必不(bu)可少。德國 MB 公(gong)司的(de)(de)(de)(de)食(shi)品質控用(yong)(yong) DNA 抽(chou)提(ti)試劑盒(he)采用(yong)(yong)離心柱法(fa),從廣泛的(de)(de)(de)(de)增菌(jun)(jun)肉湯中(zhong)提(ti)取(qu)微(wei)生(sheng)物(wu)的(de)(de)(de)(de) DNA,提(ti)取(qu)的(de)(de)(de)(de) DNA 可用(yong)(yong)于后續(xu)的(de)(de)(de)(de) PCR 檢(jian)測(ce),以確定食(shi)品中(zhong)是(shi)否存(cun)在有害(hai)微(wei)生(sheng)物(wu),如大腸(chang)桿菌(jun)(jun)、沙門氏菌(jun)(jun)、金黃色葡萄球(qiu)菌(jun)(jun)等。通過(guo)這種方法(fa),能夠及(ji)時(shi)發現食(shi)品中(zhong)的(de)(de)(de)(de)微(wei)生(sheng)物(wu)污染(ran)(ran)問(wen)題,采取(qu)相(xiang)應的(de)(de)(de)(de)措施,防止食(shi)源性疾病的(de)(de)(de)(de)發生(sheng),提(ti)高(gao)食(shi)品的(de)(de)(de)(de)質量和安全性。
(三)環境科學研究
土(tu)(tu)壤污(wu)染(ran)是一個嚴(yan)峻的環境問題,提(ti)(ti)取(qu)試劑可用(yong)(yong)于檢測土(tu)(tu)壤中(zhong)的重金屬(shu)、有(you)機污(wu)染(ran)物等(deng)有(you)害物質。例如,采用(yong)(yong)稀硝酸法、乙酸法、DTPA 法等(deng)提(ti)(ti)取(qu)劑,可以從土(tu)(tu)壤中(zhong)提(ti)(ti)取(qu)出(chu)重金屬(shu)元(yuan)素(su),如鎘、鉛、汞(gong)等(deng),通過分析這些重金屬(shu)的含量和(he)形態,評估土(tu)(tu)壤的污(wu)染(ran)程度,為土(tu)(tu)壤修復(fu)和(he)治(zhi)理提(ti)(ti)供(gong)科學依據。
在水(shui)環境研究中(zhong)(zhong),提(ti)(ti)取(qu)試(shi)劑可(ke)用于檢(jian)測水(shui)中(zhong)(zhong)的(de)(de)污(wu)(wu)染(ran)物(wu)(wu)、微(wei)(wei)生物(wu)(wu)等(deng)。例如,從水(shui)樣中(zhong)(zhong)提(ti)(ti)取(qu)藻類(lei)的(de)(de) DNA,通過對(dui)藻類(lei)的(de)(de)種(zhong)類(lei)和(he)數量進行分析,了解水(shui)體(ti)的(de)(de)富營(ying)養化程度;提(ti)(ti)取(qu)水(shui)中(zhong)(zhong)有機污(wu)(wu)染(ran)物(wu)(wu),如多環芳烴、農藥等(deng),評估(gu)水(shui)質(zhi)的(de)(de)污(wu)(wu)染(ran)狀況,為(wei)水(shui)資源的(de)(de)保護(hu)和(he)治(zhi)理(li)提(ti)(ti)供(gong)數據支(zhi)持。此外,還可(ke)以提(ti)(ti)取(qu)水(shui)中(zhong)(zhong)微(wei)(wei)生物(wu)(wu)的(de)(de)核酸,研究微(wei)(wei)生物(wu)(wu)群(qun)落結(jie)構和(he)功能,了解水(shui)體(ti)生態系統的(de)(de)健(jian)康狀況,為(wei)水(shui)環境保護(hu)提(ti)(ti)供(gong)新的(de)(de)思路和(he)方法。
04、如何(he)挑選適配的提取試(shi)劑(ji)
(一)明確研究需求
在挑選(xuan)提(ti)取試(shi)(shi)劑(ji)時(shi)(shi),首(shou)要(yao)任(ren)務是明確研究需求。不同(tong)的(de)實驗(yan)樣本類型(xing),如細(xi)胞(bao)、組織、血液、植物等,對提(ti)取試(shi)(shi)劑(ji)的(de)要(yao)求各異。以植物樣本為(wei)例(li),其細(xi)胞(bao)壁較厚,含有(you)較多的(de)多糖(tang)、多酚等次生(sheng)代謝物,在選(xuan)擇核(he)酸提(ti)取試(shi)(shi)劑(ji)時(shi)(shi),就需要(yao)考慮(lv)能夠有(you)效去(qu)除(chu)這(zhe)些雜質的(de)試(shi)(shi)劑(ji),如采(cai)用含有(you) CTAB(十六烷基三甲基溴化銨)的(de)裂解液,它可以與(yu)多糖(tang)結合(he),防止多糖(tang)對核(he)酸提(ti)取的(de)干擾(rao),從而獲得高質量的(de)核(he)酸。
目標物質的(de)特性(xing)也是關(guan)鍵因素。如(ru)果(guo)要提(ti)取的(de)是熱穩定性(xing)較差的(de)蛋(dan)白質,那么(me)在選擇蛋(dan)白質提(ti)取試(shi)劑(ji)時(shi),就(jiu)應避免使用高溫(wen)裂(lie)解的(de)方法,而采用溫(wen)和的(de)、在低溫(wen)下就(jiu)能有效(xiao)裂(lie)解細胞(bao)且能保持蛋(dan)白質活性(xing)的(de)試(shi)劑(ji),如(ru)含(han)有非(fei)離子型(xing)表面活性(xing)劑(ji)的(de)裂(lie)解液(ye)。
此(ci)外,實驗(yan)對精(jing)度和靈(ling)敏(min)度的(de)要(yao)求(qiu)也會影響試劑的(de)選(xuan)擇。對于(yu)一些對核酸純(chun)度要(yao)求(qiu)極高(gao)的(de)實驗(yan),如(ru)基因測序、克隆等(deng),就需(xu)要(yao)選(xuan)擇能(neng)夠提(ti)供高(gao)純(chun)度核酸的(de)提(ti)取試劑,如(ru)經(jing)過優(you)化的(de)硅膠(jiao)柱(zhu)法(fa)核酸提(ti)取試劑盒,其能(neng)夠通過多次(ci)洗滌(di)和洗脫步(bu)驟,有(you)效去(qu)除(chu)蛋白質、多糖、鹽等(deng)雜質,確保核酸的(de)純(chun)度滿足實驗(yan)要(yao)求(qiu)。
(二)試劑(ji)品質
試劑的(de)品(pin)質(zhi)(zhi)直(zhi)接關系到實驗結果的(de)準確(que)性(xing)和可靠性(xing)。純度(du),高純度(du)的(de)提取(qu)試劑能(neng)(neng)夠減少雜質(zhi)(zhi)對目(mu)標物質(zhi)(zhi)的(de)干擾,降(jiang)低(di)實驗誤差。在(zai)核酸(suan)提取(qu)中,雜質(zhi)(zhi)可能(neng)(neng)會抑制酶的(de)活(huo)性(xing),影響后續的(de) PCR 擴(kuo)增、酶切等實驗操作;在(zai)蛋白質(zhi)(zhi)提取(qu)中,雜質(zhi)(zhi)可能(neng)(neng)會導致蛋白質(zhi)(zhi)的(de)變性(xing)、聚(ju)集(ji),影響蛋白質(zhi)(zhi)的(de)活(huo)性(xing)和功能(neng)(neng)研究。
穩(wen)定性(xing),穩(wen)定的(de)試劑(ji)在(zai)儲存和使用過程中能(neng)(neng)夠保持(chi)其性(xing)能(neng)(neng)的(de)一致性(xing),確(que)保實驗(yan)結果的(de)重復(fu)性(xing)。一些試劑(ji)可能(neng)(neng)會因(yin)(yin)為溫度、光照(zhao)等因(yin)(yin)素的(de)影響而發生降(jiang)(jiang)解或活性(xing)降(jiang)(jiang)低,因(yin)(yin)此在(zai)選擇(ze)試劑(ji)時(shi),要了解其儲存條(tiao)件和有(you)效期,并嚴格按照(zhao)要求進行儲存和使用。
靈(ling)敏度(du),對于含(han)量較低(di)的(de)目(mu)標物質,如(ru)痕量的(de)核酸或(huo)蛋白質,需要選擇靈(ling)敏度(du)高(gao)的(de)提(ti)取試(shi)劑,能(neng)夠在(zai)低(di)濃度(du)下(xia)有效地(di)提(ti)取和富集目(mu)標物質,避免因檢測不到目(mu)標物質而(er)導(dao)致(zhi)實驗失敗。
(三)兼(jian)顧成本與效率
成(cheng)本與效率是科研中需要綜合考慮的(de)重要方面。在成(cheng)本方面,要權衡試劑(ji)的(de)價(jia)(jia)格與實(shi)驗(yan)的(de)預(yu)算。一(yi)些(xie)進口品(pin)牌的(de)試劑(ji)雖然在品(pin)質上可能(neng)有一(yi)定優勢,但(dan)價(jia)(jia)格較(jiao)高;而國產(chan)試劑(ji)在近年來(lai)也(ye)取得了很大(da)的(de)進步(bu),部分國產(chan)試劑(ji)能(neng)夠在保證一(yi)定質量的(de)前提(ti)下,提(ti)供更具性(xing)價(jia)(jia)比的(de)選擇(ze),如某些(xie)國產(chan)的(de)核酸提(ti)取試劑(ji)盒,其價(jia)(jia)格相對(dui)較(jiao)低,但(dan)在提(ti)取效率和純度上能(neng)夠滿足大(da)多數常(chang)規實(shi)驗(yan)的(de)要求,對(dui)于經(jing)費有限的(de)實(shi)驗(yan)室來(lai)說是一(yi)個不錯的(de)選擇(ze)。
操(cao)作(zuo)的便捷性也會影響(xiang)實(shi)驗(yan)效率。一(yi)些(xie)(xie)提(ti)(ti)取(qu)試(shi)劑的操(cao)作(zuo)步驟繁瑣,需要較長的時間(jian)和較多的人(ren)力投入(ru),而一(yi)些(xie)(xie)新(xin)型的試(shi)劑盒則采用(yong)了簡化的操(cao)作(zuo)流程(cheng),如基(ji)于磁珠(zhu)法的核酸提(ti)(ti)取(qu)試(shi)劑盒,其操(cao)作(zuo)相對簡單(dan),能夠(gou)在較短的時間(jian)內完(wan)成提(ti)(ti)取(qu)過程(cheng),并且可(ke)以實(shi)現自動化操(cao)作(zuo),適(shi)合大(da)規模樣本的處(chu)理,能夠(gou)大(da)大(da)提(ti)(ti)高實(shi)驗(yan)效率,減(jian)少人(ren)工誤差。
此外,提(ti)取試劑的(de)提(ti)取耗時也是需要考慮(lv)的(de)因素。對(dui)于一些對(dui)時間(jian)敏感的(de)實驗(yan),如(ru)臨床(chuang)診斷中的(de)快速檢(jian)測(ce),就需要選擇提(ti)取速度(du)快的(de)試劑,能夠在(zai)短時間(jian)內提(ti)供準確(que)的(de)檢(jian)測(ce)結(jie)果(guo),為疾病(bing)的(de)診斷和治療爭取時間(jian)。
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