2025-02-28
一、牙(ya)齦組(zu)織(zhi)：口腔健康(kang)的隱形衛士(shi)與生命科(ke)學的新(xin)藍海
當清晨刷牙(ya)時的一抹血(xue)色成為現代人(ren)的健康警報(bao)，當牙(ya)周(zhou)炎悄然成為全球第(di)六大流行疾病，人(ren)類終于將目光投向(xiang)這(zhe)片守護牙(ya)齒的"生命土(tu)壤"——牙(ya)齦組織。這(zhe)個僅有幾毫米厚的精密構造，不僅是(shi)牙(ya)齒的天然防護罩(zhao)，更是(shi)人(ren)體免(mian)疫(yi)系(xi)統與微生物群落激(ji)烈(lie)博(bo)弈的前沿陣(zhen)地(di)。
在微觀世(shi)界，牙齦組織展現著令人(ren)驚嘆的(de)(de)時空秩(zhi)序。游離齦如靈(ling)動的(de)(de)哨兵環(huan)繞(rao)牙頸，附著齦以堅(jian)韌的(de)(de)膠原網絡扎根牙槽骨，齦乳頭(tou)則在齒縫(feng)間編織精(jing)密防護網。這種三(san)維結構(gou)的(de)(de)形成，源于(yu)胚(pei)胎期外胚(pei)層與神經嵴細(xi)胞(bao)的(de)(de)精(jing)密對話(hua)，是(shi)生(sheng)命進化賦予人(ren)類(lei)的(de)(de)智能防護系(xi)統(tong)。
每平方毫米(mi)牙齦組織(zhi)中(zhong)(zhong)，約5000個(ge)上皮(pi)細(xi)胞構筑物(wu)(wu)理(li)屏障，其表(biao)面角蛋白網絡如(ru)分(fen)子(zi)篩(shai)般過濾致病菌(jun)。基底層的成纖維細(xi)胞持續分(fen)泌Ⅰ、Ⅲ型膠原，構建動態更新的細(xi)胞外基質。當菌(jun)斑生(sheng)物(wu)(wu)膜(mo)突破(po)防(fang)線，中(zhong)(zhong)性粒細(xi)胞以(yi)每分(fen)鐘3萬個(ge)的速度從齦溝液中(zhong)(zhong)涌出，樹(shu)突狀細(xi)胞則(ze)向深部(bu)組織(zhi)傳遞危險信號，啟動免疫(yi)級聯反(fan)應。
傳(chuan)統(tong)組(zu)織學研(yan)究曾將牙齦(yin)(yin)視為(wei)均質(zhi)結構(gou)，而今單細(xi)胞(bao)轉(zhuan)錄(lu)組(zu)技術正揭(jie)開其神秘面(mian)紗。這(zhe)項技術如同給每個細(xi)胞(bao)裝上(shang)"分(fen)子錄(lu)音(yin)筆"，能(neng)同時捕獲上(shang)萬(wan)細(xi)胞(bao)的基因表達圖譜(pu)。在(zai)牙齦(yin)(yin)微環境(jing)中，我們不僅能(neng)定位特定信(xin)號通路的空間(jian)熱點，還(huan)能(neng)發(fa)(fa)現具(ju)有(you)多向分(fen)化潛能(neng)的間(jian)充質(zhi)干細(xi)胞(bao)亞群，這(zhe)些發(fa)(fa)現正在(zai)改寫牙周再(zai)生醫學的底層邏輯。
當我(wo)們凝視這片(pian)維系口腔健康的"生(sheng)命(ming)綠(lv)洲"，單細(xi)胞(bao)轉(zhuan)錄組(zu)(zu)學恰似一(yi)束高能(neng)激光，穿(chuan)透組(zu)(zu)織均質化的認知迷霧。在(zai)基(ji)因表達的星海圖譜中，每個細(xi)胞(bao)都在(zai)訴說(shuo)獨特的生(sheng)命(ming)故(gu)事(shi)，這些故(gu)事(shi)終將編織成破解牙(ya)周疾病奧(ao)秘的密碼，為千(qian)萬受(shou)困于牙(ya)齦問題的人們點亮希(xi)望之光。
二、人牙齦組織解(jie)離方案
牙齦(yin)組織
1.實驗試劑配置：（1）適當(dang)體積復合酶液 （2）含2% FBS的DPBS，冰(bing)上預(yu)冷(leng) （3）完全培養(yang)基：含10% FBS的DMEM，冰(bing)上預(yu)冷(leng)
2.預處理：從組(zu)織保(bao)存液(ye)中(zhong)取(qu)出組(zu)織樣(yang)本，放入預冷的 DPBS中(zhong)清洗一到兩遍，轉移(yi)至少量復合酶液(ye)1中(zhong)，使用眼科剪將組(zu)織盡可能剪碎(sui)。
3.組織(zhi)消化：補(bu)充酶液(ye)至(zhi)一定(ding)體積，置于37℃水浴(yu)中振蕩消(xiao)(xiao)化(hua)10-15min，用巴氏吸管反(fan)復(fu)吹打多次后(hou)觀(guan)察組織；剩余組織轉移至(zhi)復(fu)合(he)酶液(ye)2中繼續消(xiao)(xiao)化(hua)5-10min，直至(zhi)組織完全消(xiao)(xiao)化(hua)，加入等體積的完全培養基終止消(xiao)(xiao)化(hua)，過30um細(xi)胞篩收集(ji)懸液(ye)。
4.裂紅：將細(xi)胞懸液(ye)4℃ 500×g 離心5 min，棄上清，加(jia)入2-3mL 體(ti)積的(de)1X RBC，室溫放置2min，加(jia)入適量DPBS（含(han)2%FBS）終止，4℃ 500×g 離心5 min。
5清洗：離心后(hou)棄上清，加(jia)入3mL DPBS（含2%FBS）重(zhong)懸沉淀(dian)，4℃ 500×g 離心5 min。棄上清，用(yong)適量DPBS(含2% FBS)重(zhong)懸細胞，進行(xing)熒光(guang)計數(shu)及臺盼藍鏡檢(jian)，調整濃度至700-1200cells/ul后(hou)上機。
（若離心(xin)重懸后出(chu)現活率不足80%，需要(yao)進行(xing)去除死細(xi)胞處(chu)理(li)。若出(chu)現碎片較多(duo)，則(ze)需要(yao)進行(xing)去碎片操(cao)作。）
三、結(jie)果展(zhan)示
活性、濃度檢測
96%活率，濃度(du)1250 cells/ul，總量15W左右。
鏡檢結果
懸液背景干凈，細胞形態完整，無明顯(xian)雜質
數(shu)據質控
上圖是下(xia)機(ji)數據cellranger質控(kong)結果(guo)，細(xi)胞(bao)捕獲數及基因(yin)數都符合(he)前期需求。
