2025-07-21
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1、ELISA 可檢測血(xue)清(qing)、血(xue)漿、細胞(bao)培養上清(qing)等多種樣本，類型豐富適(shi)用廣(guang)。
2、樣本處理(li)(li)需按類型針對(dui)性操作，血(xue)清(qing)、血(xue)漿、組織勻漿等各(ge)有處理(li)(li)要點，細節(jie)影響結果(guo)。
3、樣(yang)(yang)本保(bao)存(cun)有(you)講究，短期(qi) 2-8℃、長期(qi)需(xu)冷凍且(qie)要避免反復凍融，同時檢測用(yong)量因樣(yang)(yang)本類型而異。
ELISA技術憑借其靈敏(min)度高、特異性強的特點(dian)，成為(wei)實驗(yan)室里(li)蛋白定量檢測的“常青樹”。然而，許多實驗(yan)失敗(bai)或結果偏差的源頭，往往不在復雜的操(cao)作步驟，而在于最開始的環節——樣本(ben)準備。
一(yi)、常見ELISA檢(jian)測樣(yang)本類型
ELISA的適用性(xing)極(ji)廣(guang)，能檢測的樣本(ben)類型豐富多樣，主要(yao)包(bao)括：
1. 血清(qing)： 最常用的(de)樣(yang)本類型之(zhi)一。
2. 血漿： 血液加(jia)入抗凝劑(ji)（如肝素、EDTA、檸檬酸(suan)鈉）后離(li)心獲得的上清(qing)液。
3. 細胞培養(yang)上清液(ye)： 培(pei)(pei)養(yang)細胞分泌(mi)到培(pei)(pei)養(yang)基中的可溶性(xing)因(yin)子(zi)（如(ru)細胞因(yin)子(zi)、趨化因(yin)子(zi)、生長因(yin)子(zi)）
4. 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)液： 用(yong)于(yu)檢測組織內的目標(biao)蛋白含量。
5. 尿液： 常用于檢(jian)測(ce)特定激素、腫瘤標志物、感染標志物等。
6. 唾液、腦脊液、胸腹水等其他體(ti)液： 適用(yong)于(yu)特定研究(jiu)或診(zhen)斷目的。
二、樣本處理：細節決定成敗(bai)
不同的樣本類型(xing)，處理方(fang)法各有側重：
血(xue)清制備：
采集全血于(yu)不含(han)抗凝劑的采血管中。
室(shi)溫（22-25°C）傾斜放(fang)置 30-60分(fen)鐘，待(dai)其(qi)充分(fen)凝(ning)固。
溫和離心（推(tui)薦 1000-2000 xg，4°C，10-20分鐘）。
小(xiao)心吸(xi)取上(shang)層澄(cheng)清血清，避免吸(xi)入紅(hong)細胞或(huo)凝塊(kuai)。溶血、乳(ru)糜血（脂(zhi)血）或(huo)纖維蛋白殘留(liu)會嚴重影響結果！
血漿制(zhi)備：
采集全血于含有合適(shi)抗凝劑的采血管中(zhong)（務必確認抗凝劑兼(jian)容性）。
輕輕顛倒(dao)混勻數次，確保抗凝(ning)劑與血(xue)液(ye)充分混合。
溫和離心(xin)（條件同(tong)血清(qing)），吸取上(shang)層澄(cheng)清(qing)血漿。
細胞培(pei)養上清液：
收集培養液。
離(li)心（通常 1000-2000 xg，4°C，10分鐘）去除(chu)懸浮(fu)細胞(bao)和碎片。
立即檢(jian)測或(huo)分裝凍(dong)存。
組(zu)織勻漿(jiang)液：
新鮮(xian)組織用預冷的PBS或(huo)生理鹽水漂洗，去(qu)除血(xue)液。稱重，剪(jian)成小塊(kuai)。
加入適量(liang)預冷的組(zu)織裂(lie)解(jie)緩(huan)沖液（通常含蛋白酶(mei)抑制劑和磷酸(suan)酶(mei)抑制劑）。
在(zai)冰浴條件下進行(xing)機械勻漿（如勻漿器）或超聲破碎。
高(gao)速離心（>10, 000 xg，4°C，10-30分鐘(zhong)）。
仔細吸取上清液（即組織(zhi)勻漿上清），避(bi)免吸入(ru)沉淀或脂(zhi)層(ceng)。
尿液等體液：
通常需要(yao)離心去除不溶(rong)性顆(ke)粒。
根據目標物濃度(du)和試劑盒(he)要求，可能需(xu)要濃縮（如超(chao)濾離心）或稀釋(shi)。
三、樣本保存：時間與溫度的博弈
樣本(ben)保(bao)存不當是(shi)導致目標(biao)蛋白降(jiang)解(jie)、聚集或活性喪失的常見原(yuan)因。請遵循(xun)以下原(yuan)則：
1. 短(duan)期保(bao)存（<24小時(shi)）： 處理好的樣(yang)本（血清、血漿(jiang)、上清液等）可暫時存放(fang)于 2-8°C（冰(bing)箱(xiang)冷藏室）。
2. 長期保存（>24小時）： 必須冷凍保存。
-20°C： 適用于幾(ji)周內檢(jian)測(ce)的樣(yang)本(ben)。對于穩定性較差的蛋白(bai)（如某些細胞(bao)因(yin)子），降解(jie)風(feng)險相(xiang)對較高。
-80°C： 強烈推薦用于長期保存（數月甚至數年）。
3. 避(bi)免反(fan)復凍融。
四、檢測所需樣本量：心中(zhong)有“數”
常見(jian)范圍參考（具體務必以試劑盒(he)為準(zhun)）：
血(xue)清/血(xue)漿/細胞上(shang)清：通常起始檢測體積在 50μL - 100μL 之(zhi)間。有時需要(yao)稀釋（如1:2, 1:5, 1:10甚至更高倍數）。
組織(zhi)勻漿(jiang)上(shang)清：因組(zu)織類型、裂(lie)解(jie)效率和目標物豐度差異巨大(da)，體積變化范圍(wei)很寬(kuan)（可能從10μL到100μL不等）。
尿液(ye)：可能需要較(jiao)大(da)體積（如(ru)100μL或更(geng)多）或進行濃縮處理。
五、結 語
ELISA實驗的(de)基石(shi)，始于(yu)一份處理規范、保存得當、用量準確的(de)樣本。看(kan)似簡(jian)單(dan)的(de)樣本準備(bei)環節，實則暗藏(zang)玄機(ji)，直接(jie)影響(xiang)最終(zhong)數據的(de)可(ke)(ke)靠性、準確性和(he)可(ke)(ke)重(zhong)復性。在按(an)下移液槍開始正式檢測(ce)之(zhi)前，請務必投(tou)入足夠的(de)時間和(he)耐心，為(wei)你的(de)ELISA實驗準備(bei)好這(zhe)份完美的(de)“食材”。派(pai)森諾竭(jie)誠為(wei)大家提供各(ge)種屬Elisa檢測(ce)試劑盒，助力每一位生命科學實驗室的(de)科研人收(shou)獲屬于(yu)自己(ji)的(de)完美實驗結果(guo)，逐夢高(gao)分文(wen)章~
