單細胞測序解離項目經驗合集-畜禽動物組織樣本

2025-09-09

從(cong)人源樣本到模式生(sheng)物小鼠，前兩期(qi)的單(dan)細(xi)胞(bao)解(jie)離技巧已幫大家(jia)避(bi)開不(bu)少坑(keng)；這一期(qi)，我們專(zhuan)門(men)聚焦畜禽領域，拆解(jie)牛(niu)、羊、豬等動物組(zu)織的解(jie)離難點與解(jie)決方案！

派森諾(nuo)單(dan)細胞平臺(tai)已成功完成5000+單(dan)細胞樣(yang)本(ben)測序，有著豐富(fu)的(de)解離經驗，以下是(shi)部分派森諾(nuo)曾做(zuo)過(guo)的(de)畜禽動物組織樣(yang)本(ben)類(lei)型：

一、先搞懂：畜禽動物組織解離的 3 大核心難點

不(bu)同于(yu)小鼠、人等模式生物，畜(chu)禽動物樣本的解離難(nan)度往(wang)往(wang)更高，主要(yao)集中在這三點：

1. 個體差異顯著：同(tong)(tong)一動物不同(tong)(tong)組織、同(tong)(tong)一組織不同(tong)(tong)生長階段、不同(tong)(tong)品(pin)種的(de)細胞(bao)密度、間質成分(fen)差異巨大，方案可重復(fu)性挑(tiao)戰大。

2. 結締組織(zhi)豐富：肌肉，真皮等組織纖(xian)維粗大，常規(gui)酶液(ye)難以滲(shen)透，導致細胞(bao)很(hen)難解離出來。

3. 雜(za)質污(wu)染風險高：腸道(dao)、皮膚、乳腺(xian)等組(zu)織易(yi)攜帶細菌、飼料(liao)殘渣(zha)、毛發等雜質(zhi)，若解離時處理不當，會導致后續測序(xu)數據中雜菌序(xu)列占(zhan)比超標，浪費成本。

二、實戰指南：我們的經驗(yan)合集

我們(men)從上百(bai)個實戰項目中，提煉(lian)出了這份(fen)寶貴的經(jing)驗合集：

三、避(bi)坑寶典：常見問題及(ji)解決(jue)方案

1. 酶解時間過長：細胞活性驟降

解決方案：采用(yong)(yong) “定時取(qu)樣觀(guan)察(cha)法”—— 孵育 20min 后，取(qu)少量組織用(yong)(yong)顯微(wei)鏡觀(guan)察(cha)，當 80% 組織塊分散成小團（而非完全(quan)單個細胞）時，立即加入含 10% FBS 的培養基終止(zhi)反應（FBS 可抑制酶活性(xing)）。

2. 肌肉組織(zhi)纖維殘(can)留：堵塞測序(xu)芯片(pian)

解(jie)決方案：采用 “二級過濾(lv)法”—— 先用 100 μm篩(shai)網過濾(lv)去除大塊纖維，再(zai)(zai)用 40μm 細胞篩(shai)過濾(lv)殘(can)留細絲(si)；若(ruo)仍有纖維，可(ke)加入 0.1% 的膠原酶(mei)再(zai)(zai)次孵育(yu) 5min（溫和去除殘(can)留纖維）。

四、部分項目經驗展(zhan)示