2025-09-12
在植(zhi)物(wu)(wu)單(dan)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)測序研究中，獲取高質量的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)核是后續實(shi)驗成功的(de)關鍵(jian)前提(ti)。相(xiang)較于原生質體分離，植(zhi)物(wu)(wu)樣(yang)(yang)本(ben)抽(chou)核技術能(neng)突破細(xi)(xi)(xi)胞(bao)壁堅韌、組(zu)織纖維化等限制，適用于更多難解(jie)離的(de)植(zhi)物(wu)(wu)組(zu)織（如木質化莖稈、成熟(shu)種子），且(qie)能(neng)有效保(bao)留細(xi)(xi)(xi)胞(bao)異(yi)質性。今天，我們就從抽(chou)核方法，常見問題與解(jie)決方案，全(quan)方位分享(xiang)植(zhi)物(wu)(wu)樣(yang)(yang)本(ben)抽(chou)核的(de)實(shi)戰經驗，幫你避開科研 “坑點”。
派森諾單(dan)細胞平臺(tai)已(yi)成功完成5000+單(dan)細胞樣本測(ce)序，有(you)著豐富的項目經驗，以下是部分派森諾曾做過的植(zhi)物組(zu)織抽核樣本類(lei)型：
一、抽核方案
1. 樣本(ben)處理
凍存的植物組織在液氮中研(yan)磨成粉末狀(zhuang)，轉(zhuan)移(yi)至(zhi)5ml管中備用。
2. 細(xi)胞核釋放
加(jia)入3ml NIB裂解液(ye)，使用組織研磨(mo)儀磨(mo)碎組織，使細(xi)胞核(he)釋放，DAPI觀察細(xi)胞核(he)釋放情(qing)況(kuang)。
3. 清洗(xi)
使用NB溶液終止細胞核裂解(jie)，離(li)(li)心(xin)（根(gen)據不同組織類型(xing)調整離(li)(li)心(xin)力,范圍在(zai)500-1000g）,5min。
4. 去雜質
通(tong)過流(liu)式分選DAPI陽性(xing)的細胞(bao)核，進(jin)行去(qu)雜質(zhi)處理(li)
5. 質檢
流式分選后(hou)的細(xi)胞核離心，合適體(ti)積(ji)重懸(xuan)后(hou)使用AOPI染料計(ji)數(shu)，熒光顯微鏡觀察(cha)細(xi)胞核完整度。
二、常見問題與解決方案(an)
1. 細胞核破裂(lie)率超過 20%怎么辦？
研磨時減少時間（如從(cong) 5min 縮短至(zhi) 3min），或更(geng)換為(wei)玻璃勻漿器（力度更(geng)溫和）；
降低離心(xin)(xin)轉速（如從 1000×g 降至 800×g），延(yan)長離心(xin)(xin)時間（從 10min 增至 15min）。
2. 細胞質(zhi) / 雜(za)質(zhi)污染(ran)嚴重怎么辦？
增加過濾(lv)次數(shu)（如(ru)先用(yong) 70μm 篩(shai)網初濾(lv)，再用(yong) 40μm 篩(shai)網精(jing)濾(lv)），并確保(bao)每次過濾(lv)后(hou)用(yong) NB 沖(chong)洗(xi)篩(shai)網；
在 NIB 中加入(ru) 2% PVP（去除酚類(lei)雜(za)質(zhi)）
三、部分結(jie)果展示
楊(yang)樹根尖
楊(yang)樹葉片
楊樹(shu)莖
棉花根
柳(liu)樹葉片
