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我尋著你的足跡---熒光定量PCR技術

2016-09-18

熒(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)定(ding)(ding)(ding)量(liang)(liang)(liang)PCR技(ji)術(shu)是通(tong)(tong)過熒(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)染料或熒(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)標記的特異(yi)性(xing)(xing)探針,對(dui)(dui)PCR產(chan)(chan)物進行標記跟蹤,實時監控PCR反(fan)應(ying)過程。隨著PCR反(fan)應(ying)的進行,反(fan)應(ying)產(chan)(chan)物不斷累積(ji),熒(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)信號(hao)強(qiang)度(du)也等(deng)比(bi)例增加。每經過一個循(xun)環,收(shou)集一次(ci)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)強(qiang)度(du)信號(hao),這(zhe)樣就可以(yi)通(tong)(tong)過熒(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)強(qiang)度(du)變(bian)化監測產(chan)(chan)物量(liang)(liang)(liang)的變(bian)化,結合相(xiang)應(ying)的軟(ruan)件對(dui)(dui)產(chan)(chan)物進行分析(xi),可以(yi)得到熒(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)擴增曲線,計算待測樣品(pin)初始模版(ban)的量(liang)(liang)(liang)。實時熒(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)定(ding)(ding)(ding)量(liang)(liang)(liang)PCR技(ji)術(shu)是一次(ci)由(you)定(ding)(ding)(ding)性(xing)(xing)技(ji)術(shu)向定(ding)(ding)(ding)量(liang)(liang)(liang)技(ji)術(shu)的飛躍(yue),運用該項(xiang)技(ji)術(shu),可以(yi)對(dui)(dui)DNA、RNA樣品(pin)進行相(xiang)對(dui)(dui)定(ding)(ding)(ding)量(liang)(liang)(liang)、絕對(dui)(dui)定(ding)(ding)(ding)量(liang)(liang)(liang)和定(ding)(ding)(ding)性(xing)(xing)分析(xi)。它提高了普(pu)通(tong)(tong)PCR技(ji)術(shu)的特異(yi)性(xing)(xing)和準確性(xing)(xing),廣泛應(ying)用于基(ji)礎研(yan)究、臨(lin)床檢驗、海關商貿檢疫等(deng)各個領域。


1.相對定量

包括RNA提取、反轉錄和擴增,采用SYBR Green I法和TaqMan探針法兩種方式,一般采用2-△△CT法進(jin)行(xing)計算,每個樣本包含(han)三次技術重復。

項目結(jie)題(ti)后(hou)提(ti)供完整詳細(xi)的(de)的(de)結(jie)題(ti)報告,包(bao)括(kuo)技(ji)術(shu)路線、實(shi)驗具體(ti)操作、擴增(zeng)曲線、融解曲線和具體(ti)的(de)實(shi)驗數據分析及完善的(de)后(hou)期技(ji)術(shu)支(zhi)持。

結果示例

          擴增曲線                        融解曲線


表達定量(2-△△CT


2.絕對定量

需要(yao)制備標(biao)(biao)準(zhun)品并(bing)建(jian)立標(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian),然(ran)后檢測(ce)目的(de)樣本(ben)中的(de)基(ji)因,比對標(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)得(de)到基(ji)因準(zhun)確拷貝(bei)數。

項(xiang)目結題后(hou)提供完整詳細的(de)結題報告,包括技術路線(xian)、實驗具體操作(zuo)、標準曲線(xian)、擴增曲線(xian)和(he)具體的(de)實驗數據分析(xi)及完善的(de)后(hou)期技術支持。

結果示例


標準曲線


 

擴增曲線


3、我們的優勢

①專業平臺

RAININ電動(dong)移(yi)液器,準確、穩定移(yi)液;

使(shi)用定(ding)量PCR儀中(zhong)常(chang)用的(de)ABI StepOne Plus,穩定(ding)性(xing)好;

核心試劑采用美國(guo)原裝(zhuang)進口(kou)KAPA試劑,優異(yi)的信(xin)號和(he)反應效率,實驗結果準確,重復性好。

②豐富的qPCR經驗

基因類別有(you)DNA、mRNA、miRNA;物種(zhong)類別有(you)人、鼠、雞、藍藻、酵(jiao)母菌、反硝化菌、線(xian)蟲、蘋(pin)果(guo)、核桃等(deng)(deng)等(deng)(deng)。

③周期短

一周出結果


4、需客戶提供

詳細的實驗要求,數據分析(xi)要求,基因名稱(提供Genbank登錄號),待測(ce)樣(yang)本(ben)(清晰樣(yang)品(pin)編號),保證(zheng)樣(yang)本(ben)質量(liang)。