2019-06-25
文案 | 轉(zhuan)錄調(diao)控事業部
轉(zhuan)錄(lu)組(zu)測(ce)序(xu)(xu)(xu)作為(wei)研(yan)究(jiu)基(ji)因(yin)表(biao)(biao)達的(de)(de)利器(qi)，已成為(wei)分子(zi)生物學研(yan)究(jiu)領域常用的(de)(de)重要(yao)(yao)技(ji)術，轉(zhuan)錄(lu)組(zu)測(ce)序(xu)(xu)(xu)通過(guo)(guo)對mRNA反(fan)轉(zhuan)錄(lu)形(xing)成的(de)(de)cDNA進(jin)行(xing)測(ce)序(xu)(xu)(xu)從而分析基(ji)因(yin)表(biao)(biao)達量，為(wei)了(le)(le)使cDNA濃度達到上(shang)機測(ce)序(xu)(xu)(xu)要(yao)(yao)求，我(wo)們需要(yao)(yao)對cDNA片段進(jin)行(xing)擴(kuo)增(zeng)(zeng)。由(you)于PCR擴(kuo)增(zeng)(zeng)具有偏好性，不同(tong)的(de)(de)cDNA片段被放(fang)大(da)的(de)(de)倍(bei)數不均一，再加(jia)上(shang)測(ce)序(xu)(xu)(xu)過(guo)(guo)程(cheng)中有些片段會被過(guo)(guo)度擴(kuo)增(zeng)(zeng)，這能(neng)夠使我(wo)們了(le)(le)解基(ji)因(yin)表(biao)(biao)達大(da)體趨(qu)勢，但是(shi)無法滿足對基(ji)因(yin)原始表(biao)(biao)達量的(de)(de)絕對定量。
派(pai)森(sen)諾生物(wu)推出超低RNA起始量(liang)(liang)的絕對(dui)定量(liang)(liang)轉錄組測序(xu)，將在(zai)cDNA擴(kuo)增前，為所有cDNA片段(duan)添(tian)加上(shang)特異標簽-UMI（Unique Molecular Identifiers），通過計算與cDNA相(xiang)連的UMI個數(shu)，就能準確獲(huo)得原始的cDNA數(shu)量(liang)(liang)，實現(xian)基(ji)因表達(da)的準確定量(liang)(liang)。
UMI絕(jue)對定量(liang)實驗原理
絕對定量轉(zhuan)錄組優(you)勢
? RNA起(qi)始(shi)量(liang)低(di)，更(geng)適合量(liang)少與(yu)珍(zhen)貴樣品(pin)
? 基因(yin)表達水平的準確定量，避免(mian)低豐度基因(yin)丟失(shi)
? 準確定量(liang)動植(zhi)物中寄生菌的轉錄本
? 可區(qu)分天然重復與(yu)擴(kuo)增重復，準確識別可變剪切事(shi)件
? 校正擴增過程中出現的(de)堿基錯誤，使RNA編輯(ji)分析(xi)更為準確
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參考文獻
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