2019-08-28
什么(me)是動物石蠟切片
動物石蠟切片是(shi)我們進行人(ren)、動(dong)物(wu)疾病(bing)診斷(duan)、病(bing)理學(xue)研究(jiu)、教學(xue)的一種重(zhong)要(yao)方法(fa)。動(dong)物(wu)石蠟(la)(la)切片制(zhi)作過程中取材、固定、脫水、透明、浸(jin)蠟(la)(la)、切片、展片、染色等步(bu)驟。隨(sui)著科學(xue)研究(jiu)的進步(bu)，目前在人(ren)、動(dong)物(wu)傳(chuan)染病(bing)的診斷(duan)方面經常采(cai)用準確、快速的PCR、Elisa等分子生物學方法。但是，PCR、Elisa等方法要求操作精細、準確，由于操作不當會出現假陽性或假陰性；對于腫瘤等內科病也無法診斷。石蠟切片可以直觀的觀察到組織細胞的病理變化，是一種準確、低廉的診斷疾病方法，在疾病診斷、病理學研究、教學等方面廣泛應用。
實(shi)驗(yan)原理
采用光學顯(xian)微鏡(jing)研究(jiu)一般(ban)生物體的內部結構，在(zai)自然狀(zhuang)態下是無法觀察清楚的，多數動、植物材(cai)料(liao)都必須經過某種處理，將組織分離(li)成(cheng)單(dan)個細(xi)胞或薄片，光線才能通過細(xi)胞。為了(le)適(shi)應這個需要，就產生了(le)光學顯(xian)微鏡(jing)制片技術。
光學(xue)顯微鏡(jing)的制片(pian)技術方(fang)法可分為(wei)兩大(da)類(lei)：一類(lei)是(shi)非切(qie)片(pian)法，另(ling)一類(lei)是(shi)切(qie)片(pian)法。
非切片法，是用(yong)物理或化學的方法，使細胞(bao)彼此分離，如有分離法、涂(tu)布(bu)法、壓碎法等(deng)。非切片法的操作比較(jiao)簡單，能保(bao)侍細胞(bao)的完(wan)整，但是細胞(bao)之間(jian)的正(zheng)常位(wei)置往往被更動，無法反映(ying)細胞(bao)之間(jian)的正(zheng)常聯系。它可以與切片法配合使用(yong)，各取其(qi)長處。
切片法(fa)，是(shi)(shi)(shi)利用銳利的刃具將組(zu)織切(qie)成極薄(bo)的片層，材料(liao)須經(jing)過一(yi)系列特殊的處理(li)(li)，如固定、脫水、包埋、切(qie)片、染色(se)等，過程十分繁復(fu)。在制作(zuo)過程中，還要經(jing)過一(yi)系列的物(wu)理(li)(li)和(he)化(hua)學的處理(li)(li)，這些處理(li)(li)方法可根(gen)據各種不同材料(liao)的性質要求進(jin)行合理(li)(li)選擇。切(qie)片法雖然工序繁瑣，技術復(fu)雜，但是(shi)(shi)(shi)，它能(neng)(neng)保持細胞(bao)間的正常的相互關系，能(neng)(neng)較好和(he)較長(chang)時間地保留細胞(bao)的原貌，所以仍然是(shi)(shi)(shi)光學顯微鏡的主要制片方法。
優(you)點(dian)：石蠟能切出極薄的蠟片（2～10μm）；切片時能連成蠟帶，便于制作連續切片；操作較容易，組織塊可以包埋在石蠟中長期保存。
缺點：石蠟切片(pian)的制(zhi)(zhi)作過(guo)程(cheng)較長，步驟很多，一(yi)步不(bu)慎往往導致前功盡(jin)棄，而且這些處理引起組織塊(kuai)或多或少地收縮，切片(pian)時受(shou)濕(shi)度影(ying)響(xiang)比(bi)較大，這些不(bu)足之處必須在制(zhi)(zhi)片(pian)過(guo)程(cheng)中認真(zhen)對待，盡(jin)量減小它的不(bu)良影(ying)響(xiang)。
后續(xu)研究背景(jing)與目的
從福爾馬林固(gu)定、石(shi)蠟包埋組織內提取DNA一直以來都是一項困擾著眾多研究人員的難題。
甲醛作為常(chang)用固定液福爾馬林的一個(ge)重要(yao)成分，可(ke)以(yi)引(yin)起(qi)核(he)酸(suan)(suan)大(da)分子之(zhi)(zhi)間(jian)以(yi)及核(he)酸(suan)(suan)與蛋白質之(zhi)(zhi)間(jian)的廣(guang)泛交聯，這一反應將(jiang)會導致(zhi)從組織內(nei)提(ti)取DNA十分困難。不僅如此，如果固定所用的固定液不是緩沖型中性福爾馬林溶液，還將出現甲醛被氧化生成甲酸后，固定液的PH值大幅降低，有時甚至會出現PH小于1的情況，這種酸性的環境將會導致DNA鏈的斷裂。
這些作(zuo)用都導致(zhi)無法利用PCR擴增技術得到滿意的DNA片段長度和含量，從而嚴重影響了分子生物學研究。盡管從福爾馬林固定石蠟包埋組織提取DNA十分困難，但卻不能忽視這些組織可能為基因遺傳學等研究提供的信息。在世界各地的醫院及病理研究所都儲存著大量的固定組織，它們常是唯一的致病相關基因研究重要的研究對象。正是因為如此，越來越多的學者開始研究如何從固定組織提取高質量DNA，并有一系列的相關論文逐漸發表。
不(bu)容樂觀的(de)是(shi)，雖(sui)然相關性文(wen)章在不(bu)斷增多(duo)，但(dan)是(shi)這些(xie)文(wen)章所提及的(de)方法，能夠達提取(qu)到(dao)高質(zhi)量(liang)DNA的并不多。
首先(xian)，因為研究(jiu)目(mu)的不同(tong)，對目(mu)的基(ji)因要求不同(tong)，很難用同(tong)一的標準(zhun)來判(pan)定提取DNA的質量；
其次，雖然有(you)些方法(fa)可(ke)以保證提取出的DNA含量，但是因為這些組織內的DNA多由于固定的原因而降解成較小的DNA片段，盡管含量可觀，無法保證片段長度，這種方法仍難以推廣。
其實，影響固定組(zu)織內DNA質量的因素有很多，大體可以分為：
1．固(gu)定(ding)前(qian)因素，這就包括了組織的類(lei)型和大(da)小，固(gu)定(ding)前(qian)它的腐敗程度等(deng)等(deng)；
2．固(gu)(gu)定(ding)(ding)因(yin)素，包括(kuo)了(le)選取何種(zhong)固(gu)(gu)定(ding)(ding)液，固(gu)(gu)定(ding)(ding)液的PH值(zhi)，溫度(du)以(yi)及固(gu)(gu)定(ding)(ding)時間的長短等；
3．固定后因素，例(li)如固定后儲(chu)(chu)存時間(jian)的(de)長(chang)短和儲(chu)(chu)存溫度的(de)高低等。
面對(dui)上述影響因素，想要(yao)找到一種理想的提(ti)取(qu)方(fang)法需要(yao)進(jin)一步(bu)研究，并結(jie)合考慮樣材情況。因此不能對(dui)已(yi)提(ti)出方(fang)法的效果妄下(xia)判斷，這些方(fang)法可以減少某(mou)一影響因素的影響，卻不能同時(shi)解(jie)決所(suo)有問(wen)題。例如，在關于組織消化(hua)(hua)時(shi)間的問(wen)題上，有的學(xue)者就提(ti)出加(jia)入消化(hua)(hua)酶后(hou)，盡可能延長孵(fu)育(yu)時(shi)間是(shi)十分有利的；但也有的學(xue)者提(ti)出消化(hua)(hua)時(shi)間不宜超過3個小時。這些看似矛盾的結論，其實是基于不同的因素考慮。在當前國內外發表的文章中，所提及的提取辦法有的是較以往有較大不同的，有的僅是在特定步驟稍作改動的。
派森諾石蠟核酸提取服務
進口特殊的(de)裂解緩沖液原料可以(yi)獲得超短的(de)裂解時間(jian)
無(wu)需要去石蠟化
無需使用苯(ben)(ben)酚(fen)，辛烷或二甲苯(ben)(ben)等有害(hai)或有毒成分
在不到(dao)2.5小時的時間內實現高產量和質量
適(shi)用(yong)于多(duo)種組織(zhi)樣本
DNA完(wan)整性(xing)高
圖1 DNA電泳(yong)圖
表(biao)1 濃度表(biao) （與(yu)上表(biao)對應）
表2 各處理比較
關于送(song)樣要(yao)求
厚度5~20um
石蠟(la)切片> 5片
派森諾石(shi)蠟樣本還可以完成(cheng)的服務(wu)
甲基化分析(xi)服務
外顯子測序
SNP基因分型測(ce)序
微衛(wei)星(xing)遺傳標記
熒光定量PCR服務
