2017-09-14
馬(ma)鈴薯(shu)膨大的(de)(de)(de)含淀粉的(de)(de)(de)塊莖、柑(gan)橘(ju)富(fu)含維生素C的(de)(de)(de)果(guo)(guo)實、辣椒的(de)(de)(de)口感辛辣的(de)(de)(de)果(guo)(guo)實、園(yuan)林植物(wu)多(duo)樣的(de)(de)(de)花(hua)(hua)形(xing)(xing)、藥用植物(wu)具(ju)生物(wu)活性(xing)的(de)(de)(de)次生代謝產物(wu)……高等植物(wu)豐富(fu)多(duo)樣的(de)(de)(de)特化的(de)(de)(de)性(xing)狀(zhuang)(zhuang)廣(guang)泛吸引了研(yan)(yan)究(jiu)者(zhe)的(de)(de)(de)關注(zhu)。目前,研(yan)(yan)究(jiu)熱(re)點(dian)主要集中于具(ju)有(you)生產效益和經濟價值的(de)(de)(de)性(xing)狀(zhuang)(zhuang)上,研(yan)(yan)究(jiu)方(fang)(fang)向(xiang)涉及(ji)果(guo)(guo)實發育成(cheng)熟(shu)、特異代謝產物(wu)合成(cheng)、農(nong)藝性(xing)狀(zhuang)(zhuang)(產量、品質)、園(yuan)藝性(xing)狀(zhuang)(zhuang)(花(hua)(hua)形(xing)(xing)、花(hua)(hua)期)、植株(zhu)病蟲抗性(xing)等方(fang)(fang)面。通過基因de novo測序可(ke)以一次鑒定到(dao)目標性(xing)狀(zhuang)(zhuang)的(de)(de)(de)多(duo)個相(xiang)關基因,發現新的(de)(de)(de)基因位點(dian),揭示性(xing)狀(zhuang)(zhuang)形(xing)(xing)成(cheng)和調控的(de)(de)(de)遺傳機(ji)制,為進一步的(de)(de)(de)驗證和應(ying)用提(ti)供指(zhi)導。
性(xing)狀相關基(ji)(ji)因(yin)(yin)鑒定(ding)分析的實驗設計主要(yao)包括種(zhong)間比(bi)(bi)較(jiao)(jiao)和種(zhong)內(nei)比(bi)(bi)較(jiao)(jiao)兩個途(tu)徑。種(zhong)間比(bi)(bi)較(jiao)(jiao)常(chang)通過遺傳(chuan)和表(biao)(biao)型差(cha)異(yi)(yi)較(jiao)(jiao)大的品(pin)種(zhong)間比(bi)(bi)較(jiao)(jiao)、同(tong)屬(shu)或同(tong)科(ke)的近緣有參物(wu)種(zhong)間比(bi)(bi)較(jiao)(jiao),或以模(mo)式植物(wu)擬南(nan)芥為參考進(jin)行比(bi)(bi)較(jiao)(jiao),鑒定(ding)并比(bi)(bi)較(jiao)(jiao)目標性(xing)狀相關的同(tong)源(yuan)基(ji)(ji)因(yin)(yin),比(bi)(bi)較(jiao)(jiao)內(nei)容涉及基(ji)(ji)因(yin)(yin)表(biao)(biao)達(da)情況(kuang)(kuang)和拷貝數等。種(zhong)內(nei)比(bi)(bi)較(jiao)(jiao)通常(chang)考察相關基(ji)(ji)因(yin)(yin)的表(biao)(biao)達(da)情況(kuang)(kuang),通過在根、莖、葉、花、果等不同(tong)組(zu)織部(bu)位取(qu)樣(yang),或在不同(tong)生(sheng)長發育階段(duan)取(qu)樣(yang),來比(bi)(bi)較(jiao)(jiao)目標基(ji)(ji)因(yin)(yin)的表(biao)(biao)達(da)差(cha)異(yi)(yi)并分析其與特(te)異(yi)(yi)性(xing)狀的關系。基(ji)(ji)因(yin)(yin)表(biao)(biao)達(da)模(mo)式的檢測常(chang)采用轉錄組(zu)測序(xu)或表(biao)(biao)達(da)譜(pu)測序(xu),或進(jin)行拷貝數檢測等。
對(dui)于實驗結(jie)果(guo)的(de)(de)(de)討(tao)論可結(jie)合(he)(he)研究物種的(de)(de)(de)特(te)點,綜(zong)合(he)(he)進(jin)化(hua)(hua)分析內容,如基因家族的(de)(de)(de)擴(kuo)張/收縮(suo)、全基因組倍增事件、多倍化(hua)(hua)事件等驅動高(gao)等植物進(jin)化(hua)(hua)的(de)(de)(de)事件或馴(xun)化(hua)(hua)改良施加的(de)(de)(de)選擇壓力,提出目標基因可能的(de)(de)(de)形(xing)成原(yuan)因,闡(chan)釋目標性狀(zhuang)產生(sheng)的(de)(de)(de)遺傳(chuan)和(he)分子機制,并規劃進(jin)一步的(de)(de)(de)驗證(zheng)工作。通過以下文獻案例,我們可對(dui)這方面的(de)(de)(de)研究思路窺見端(duan)倪(ni)。
1. 辣椒果實發育及辣椒素(su)合成相(xiang)關基因
這是2014年PNAS的一(yi)篇文章,通(tong)過對同(tong)屬茄科但分屬不同(tong)果實發(fa)育模(mo)式(shi)的辣椒(jiao)和(he)番(fan)茄的比較,鑒定了果實發(fa)育相關基因,通(tong)過對辛辣和(he)不辣的辣椒(jiao)品種的比較及轉錄組測序,鑒定了辣度相關基因并分析了其表達模(mo)式(shi)。
果實(shi)的(de)成熟(shu)過程顯(xian)著(zhu)影響(xiang)果實(shi)品質和(he)保存期(qi)限,在(zai)躍變型果實(shi)(番(fan)茄)和(he)非躍變型果實(shi)(辣椒(jiao))間差異顯(xian)著(zhu)。非躍變型果實(shi)軟化過程更為緩慢(man)且對(dui)乙烯無響(xiang)應。比(bi)較番(fan)茄和(he)辣椒(jiao)在(zai)果實(shi)成熟(shu)期(qi)的(de)表達譜,發現番(fan)茄有2281個特(te)異基(ji)因(yin),而辣椒(jiao)有1440個特(te)異基(ji)因(yin),這兩個物種的(de)特(te)異基(ji)因(yin)均涉(she)及(ji)細(xi)胞壁(bi)重構(gou)、激素信(xin)號傳導和(he)代謝(xie)、碳水(shui)化合(he)物代謝(xie)、蛋白質降解以及(ji)非生物逆境響(xiang)應等。
但(dan)兩者的(de)(de)(de)差(cha)(cha)異(yi)在(zai)于以下(xia)4點:1)涉及乙烯生物合(he)成(cheng)的(de)(de)(de)基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)數(shu)目在(zai)辣(la)(la)(la)椒(jiao)(jiao)中(zhong)更(geng)低,辣(la)(la)(la)椒(jiao)(jiao)的(de)(de)(de)8個(ge)(ge)編(bian)碼1-氨基(ji)(ji)(ji)(ji)環丙(bing)烷-1-羧酸鹽合(he)酶(乙烯生產的(de)(de)(de)關鍵酶)的(de)(de)(de)基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)在(zai)果實(shi)成(cheng)熟(shu)過(guo)(guo)程中(zhong)無一上調,與(yu)辣(la)(la)(la)椒(jiao)(jiao)較(jiao)低的(de)(de)(de)乙烯合(he)成(cheng)一致(zhi),而(er)番茄中(zhong)的(de)(de)(de)2個(ge)(ge)該基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)被強(qiang)烈(lie)誘(you)導(dao);2)在(zai)辣(la)(la)(la)椒(jiao)(jiao)中(zhong)與(yu)乙烯信(xin)號(hao)和茉莉酸信(xin)號(hao)傳導(dao)相關的(de)(de)(de)差(cha)(cha)異(yi)表(biao)(biao)達(da)(da)基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)(de)數(shu)目更(geng)低;3)與(yu)生長素(su)和脫(tuo)(tuo)落酸相關的(de)(de)(de)差(cha)(cha)異(yi)表(biao)(biao)達(da)(da)基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)數(shu)目更(geng)大,包括與(yu)非生物逆境相關的(de)(de)(de)基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin),這與(yu)草莓(非躍變型果實(shi))成(cheng)熟(shu)過(guo)(guo)程中(zhong)脫(tuo)(tuo)落酸的(de)(de)(de)積累一致(zhi);4)葉片衰老的(de)(de)(de)負調控因(yin)子(zi)WRKY70和ZAT10在(zai)辣(la)(la)(la)椒(jiao)(jiao)中(zhong)受到(dao)更(geng)強(qiang)烈(lie)的(de)(de)(de)誘(you)導(dao),表(biao)(biao)明(ming)這些(xie)轉(zhuan)錄(lu)因(yin)子(zi)的(de)(de)(de)誘(you)導(dao)可能對(dui)于辣(la)(la)(la)椒(jiao)(jiao)的(de)(de)(de)長保存(cun)期(qi)起到(dao)重要作用;5)9個(ge)(ge)番茄XTH(木葡聚糖內源(yuan)轉(zhuan)糖基(ji)(ji)(ji)(ji)酶/水(shui)解(jie)酶)基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)中(zhong)的(de)(de)(de)15個(ge)(ge)在(zai)果實(shi)成(cheng)熟(shu)過(guo)(guo)程中(zhong)呈現差(cha)(cha)異(yi)表(biao)(biao)達(da)(da),而(er)辣(la)(la)(la)椒(jiao)(jiao)的(de)(de)(de)25個(ge)(ge)XTH基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)中(zhong)只有6個(ge)(ge)差(cha)(cha)異(yi)表(biao)(biao)達(da)(da),表(biao)(biao)明(ming)XTH活性(xing)降(jiang)低導(dao)致(zhi)辣(la)(la)(la)椒(jiao)(jiao)果實(shi)成(cheng)熟(shu)過(guo)(guo)程中(zhong)軟(ruan)化減弱。
辣(la)(la)(la)椒素(su)的(de)(de)(de)(de)積累,主要包括辣(la)(la)(la)椒素(su)和(he)二氫辣(la)(la)(la)椒素(su),為(wei)辣(la)(la)(la)椒屬(shu)植物獨有且導致了果實的(de)(de)(de)(de)辛辣(la)(la)(la)度(辣(la)(la)(la)椒素(su)合(he)成(cheng)(cheng)通(tong)路見圖(tu)1)。基(ji)于對(dui)辣(la)(la)(la)椒辣(la)(la)(la)度的(de)(de)(de)(de)前期研究,在辣(la)(la)(la)椒、番(fan)茄、馬鈴薯和(he)擬(ni)南(nan)芥(jie)中,鑒定了51個涉(she)及辣(la)(la)(la)椒素(su)合(he)成(cheng)(cheng)的(de)(de)(de)(de)基(ji)因家(jia)族及其(qi)同源基(ji)因。進化(hua)分析顯示,與(yu)其(qi)他3個物種(zhong)相比,辣(la)(la)(la)椒有獨立(li)的(de)(de)(de)(de)、特有的(de)(de)(de)(de)13個基(ji)因家(jia)族的(de)(de)(de)(de)重復(fu)(如ACLd、AT3、β-CT、C3H、CAD、CCR、Kas I和(he)PAL)。基(ji)因重復(fu)中的(de)(de)(de)(de)序列差異可(ke)能導致功能差異或新功能的(de)(de)(de)(de)產(chan)生,促(cu)進特異性的(de)(de)(de)(de)辣(la)(la)(la)椒素(su)生物合(he)成(cheng)(cheng)的(de)(de)(de)(de)進化(hua)。
圖(tu)1. 辣椒素生(sheng)物合成(cheng)通路,來源:文獻補充資料
以AT3為例,在辣椒中鑒定了3個At3(Pun1)的串聯拷貝,編碼假定的酰基轉移酶且在某些辣椒屬植物中對辣度起調控作用。野生和栽培辣椒中AT3-D1和AT3-D2均在保守的DFGWGKP結構域有氨基酸替換。對AT3-D1的分析表明(圖2),在非辛辣基因型中,pun1等位基因(C位點)有2724/2930bp的缺失,橫跨假定的啟動子區和第一外顯子。在辛辣的辣椒品種中,AT3-D1和AT3-D2(圖3)同樣鑒定到了短InDel和單堿基非同義替換。
圖2. AT3-D1基因結構,來源:文獻補充資料
圖3. AT3-D2基因結構,來源:文獻補充資料
辣椒素生物合成相關基因的組織特異性和發育相關表達模式檢測發現(圖4),多數基因家族,除ACL-D4和ACL-D5外,伴隨辣椒素積累呈現組織和發育階段特異性的表達模式。然而CCoAOMT-D9、AT3-D1和AT3-D2只在辣椒素合成的果實發育階段顯著表達。上述基因在5個非辛辣種的表達模式顯示,AT3-D1檢測不到或微量,表達缺失可能由于pun1等位基因的大片段缺失,使其成為非辛辣辣椒中的假基因。有趣的是,在非辛辣種中,AT3-D2的表達或能保持微量的辣椒素和二氫辣椒素。推測AT3-D1和AT3-D2在C位點的劑量補償效應形成了辣椒中辣度的差異。
圖4. 辣椒(jiao)素生物(wu)合(he)成相關基因表(biao)達模式,來源:文(wen)獻原文(wen)
2. 棉纖(xian)維形成和伸長相關基因分(fen)析(xi)
這篇(pian)2012年(nian)的(de)(de)(de)Nature Genetics文(wen)章通(tong)過對(dui)開花后3天(DPA)胚珠的(de)(de)(de)轉(zhuan)錄組測序(xu),在無纖維的(de)(de)(de)雷蒙德(de)氏(shi)棉(mian)和(he)有纖維的(de)(de)(de)陸(lu)地棉(mian)之間發現了關鍵成(cheng)纖維基因的(de)(de)(de)轉(zhuan)錄本的(de)(de)(de)定量差(cha)異(yi),包括Sus、KCS、ACO、MYB和(he)bHLH基因。
鑒別到的4種蔗糖合酶(Sus)基因中,3種(SusB、Sus1和SusD)在陸地棉中表達量大幅高于雷蒙德氏棉。(圖5)
圖5. Sus基因表達量差異,圖片來源:文(wen)獻原文(wen)
若干種3-酮乙基-輔酶A合酶(KCS)基因,包括KCS2、KCS13和KCS6只在陸地棉中表達,而兩種棉中都存在中等表達量的KCS7基因。表明高表達水平的Sus和KCS基因家族對于纖維細胞的形成和伸長可能確為必需的。(圖6)
圖(tu)6. KCS基因表達量差異(yi),圖(tu)片來源(yuan):文獻(xian)原文
相對的(de),編碼1-氨基(ji)環丙烷-1-羥酸氧(yang)化(hua)酶(ACO)的(de)轉錄本在(zai)雷蒙德氏(shi)棉存(cun)在(zai)極端(duan)高含量(liang),表明乙烯(xi)在(zai)纖維細胞發育早(zao)期有重要(yao)作用(yong)。(圖(tu)7)
圖7. ACO基因表達量(liang)差異,圖片(pian)來源:文(wen)獻原文(wen)
此(ci)前研究提(ti)出(chu)假設(she)(she),即(ji)棉纖維(wei)在形(xing)(xing)態和(he)起(qi)源(yuan)上與(yu)植物(wu)表(biao)(biao)皮(pi)毛相似,表(biao)(biao)皮(pi)毛為多種植物(wu)組織中存在的毛狀表(biao)(biao)皮(pi)細(xi)胞,常見于葉(xie)片和(he)莖表(biao)(biao)面(mian)。假設(she)(she)提(ti)出(chu),在擬(ni)南芥(jie)表(biao)(biao)皮(pi)毛發(fa)育中起(qi)重(zhong)要作用(yong)的轉(zhuan)錄因(yin)(yin)(yin)子可能(neng)與(yu)棉纖維(wei)形(xing)(xing)成相關。在擬(ni)南芥(jie)中,MYB和(he)bHLH類(lei)轉(zhuan)錄因(yin)(yin)(yin)子與(yu)TTG1形(xing)(xing)成復合物(wu)共(gong)同起(qi)作用(yong)調控表(biao)(biao)皮(pi)細(xi)胞發(fa)育。總(zong)計(ji)2706個(ge)轉(zhuan)錄因(yin)(yin)(yin)子,包括208個(ge)bHLH和(he)219個(ge)MYB基(ji)因(yin)(yin)(yin)在雷蒙德(de)(de)氏棉基(ji)因(yin)(yin)(yin)組中得到鑒定。大量(liang)的MYB和(he)bHLH基(ji)因(yin)(yin)(yin)在陸地棉胚珠中顯著表(biao)(biao)達(da),而雷蒙德(de)(de)氏棉胚珠中只有殘量(liang)表(biao)(biao)達(da),表(biao)(biao)明這(zhe)些基(ji)因(yin)(yin)(yin)的部分(fen)可能(neng)為纖維(wei)早期發(fa)育所必需。(圖8)
圖8. MYB和bHLH基因表達量差異,圖片(pian)來源:文(wen)獻原文(wen)
這篇文章同樣對棉子酚生物合成基因進行了鑒定和進化分析。棉會產生一種獨有的萜類,包括脫氧半棉酚、半棉酚、棉子酚、半棉酚酮、殺實夜蛾素。棉植株在色素腺體中積累棉子酚及相關倍半萜類來防御病蟲害。大部分棉倍半萜類都有一個共同前體衍生出來,(+)-δ-杜松萜烯,由(+)-δ-杜松萜烯合酶(CDN)通過法尼基二磷酸的環化作用合成,是棉子酚生物合成的第一個關鍵步驟。以前,CDN-A和CDN-C均被報道編碼CDN酶活性。利用雷蒙德氏棉和其他8種有參物種的進化分析表明,除了水稻,萜環化酶基因家族為多種植物所共有。然而,只有雷蒙德氏棉和可可(同屬錦葵目Malvales)擁有具生化功能的CDN1基因家族。似乎棉子酚合成能力與古六倍體和全基因組倍增事件均相關相關。在近緣分支的番木瓜和毛果楊中沒有發現CDN1的同源基因,表明棉子酚的產生是在這些物種分離之后出現的。DDtYD和DDVAE結構域是棉子酚生物合成的關鍵因素,其他植物萜環化酶基因不編碼含DDVAE結構域的蛋白因此不屬于CDN同源基因。
圖9. 棉子酚CDN1基因家族進化分析,圖片來源:論文原文
3. 木槿(jin)的花期和抗病基(ji)因
2017年DNA Research的一篇文章做了木槿的de novo測序并研究了花期調控和植株抗性相關基因。不同植物花發育的的遺傳和分子機制是高度保守的,包含4種主要的開花通路(光周期、自主調控、春化作用和赤霉素)。光周期通路中主要的開花信號受到FLOWERING LOCUS T (FT)的調控,而春化作用通路是通過暴露于特定刺激物后FT抑制劑的去除起作用。木槿是長日照開花植物,花期長且每天開花20~30朵不等。而一朵花只開放一天。為了揭示調控這些表型的遺傳機制,研究了無油樟、擬南芥、可可、雷蒙德氏棉和木槿中4個開花通路涉及的基因,且研究了花、子房、根和葉等不同木槿組織中的基因表達模式。
花期基因的進化分析識別到木槿特異性的分支。由于花期經常取決于基因拷貝數,使用擬南芥的基因為參考,界定不同植物基因組中拷貝數變化,發現木槿的拷貝數為其余4者的2~7倍。本研究涉及的花期調控基因中,涉及晝夜節律調節(CO,ELF4, FKF1, GI, LHY, PHYs)和花芽形成(FCA, FLK, FT,LFY, VIN3, SOC1, TFL, SVP)基因數在木槿中顯著提高。此外,調控光敏色素A信號的FAR1家族基因的拷貝數在木槿中更高。穗狀花序的植物,如大麥、水稻、小麥,同樣包含FAR1基因的高拷貝數,因此,FAR1的高拷貝數或可同樣影響木槿的表型。(表1)
表(biao)1. 花期基因拷貝數(shu)比較,圖片(pian)來(lai)源:論文原文
多數抗病基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)家(jia)族(zu)(R)編(bian)碼含NBS和(he)富含亮(liang)氨酸重(zhong)復(fu)序(xu)列(LRR)的(de)(de)(de)(de)胞內蛋白。編(bian)碼NBS的(de)(de)(de)(de)R基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)家(jia)族(zu)是木槿最大的(de)(de)(de)(de)基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)家(jia)族(zu)之(zhi)一,含472個(ge)基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin),約為(wei)無(wu)油樟和(he)擬南芥(jie)的(de)(de)(de)(de)3倍(bei)。這(zhe)些基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)基(ji)于Toll/白細胞介素受體(TIR)結(jie)構域的(de)(de)(de)(de)差異(yi)(yi)分(fen)為(wei)2個(ge)分(fen)支(zhi)。相比(bi)番茄、雷(lei)蒙德(de)氏棉和(he)可(ke)可(ke),木槿中(zhong)(zhong)TIR基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)顯(xian)(xian)著過表達。錦(jin)(jin)葵(kui)目植物(木槿、可(ke)可(ke)、雷(lei)蒙德(de)氏棉)中(zhong)(zhong)多于70%的(de)(de)(de)(de)編(bian)碼NBS的(de)(de)(de)(de)基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)在26個(ge)亞(ya)類中(zhong)(zhong)共享,表明多數R基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)由共同(tong)祖(zu)先(xian)衍生而(er)來。另外,木槿中(zhong)(zhong)來自(zi)4個(ge)亞(ya)類的(de)(de)(de)(de)125個(ge)NBS編(bian)碼基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)約比(bi)其他錦(jin)(jin)葵(kui)科植物擴增了(le)5倍(bei),而(er)來自(zi)7個(ge)亞(ya)類的(de)(de)(de)(de)18個(ge)NBS編(bian)碼基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)為(wei)木槿獨有。木槿基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)組(zu)中(zhong)(zhong)TIR和(he)RPW8編(bian)碼基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)亞(ya)類顯(xian)(xian)示(shi)出廣泛的(de)(de)(de)(de)擴張(zhang),經歷(li)了(le)不(bu)(bu)均等復(fu)制事件,顯(xian)(xian)示(shi)出植物基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)組(zu)中(zhong)(zhong)高度多樣性。木槿基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)組(zu)中(zhong)(zhong)不(bu)(bu)同(tong)的(de)(de)(de)(de)R基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)組(zu)成提示(shi)成簇的(de)(de)(de)(de)R基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)的(de)(de)(de)(de)擴張(zhang)和(he)多樣性可(ke)能(neng)涉及種系特(te)異(yi)(yi)性的(de)(de)(de)(de)基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)倍(bei)增事件,最終導致近緣種的(de)(de)(de)(de)趨異(yi)(yi)進(jin)(jin)化。這(zhe)些結(jie)果為(wei)多年生植物中(zhong)(zhong)花期和(he)抗病基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)的(de)(de)(de)(de)進(jin)(jin)一步比(bi)較分(fen)析提供了(le)初步的(de)(de)(de)(de)信息支(zhi)持。(表2)
表(biao)2. NBS-LRR基因家族數目(mu)比(bi)較
參考文(wen)獻
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