2020-03-13
又到了一年春暖花(hua)開(kai)的日子，全國疫情防控形(xing)勢在持續向好(hao)。
在(zai)繼(ji)續保持防范意識，努力保護自己的(de)同時，科研工作者們也沒有停(ting)下研究的(de)步(bu)伐，今天小編就(jiu)帶(dai)大家了解一(yi)下常規轉(zhuan)(zhuan)錄組的(de)升級版-“絕對定量轉(zhuan)(zhuan)錄組”。
什么(me)是(shi)絕對定量轉錄組呢？
由于PCR偏(pian)好性等客(ke)觀因素的影響(xiang)，常規轉錄(lu)組(zu)測序的基(ji)因表達定量會受到影響(xiang)。那(nei)么怎么來解決這一問(wen)題呢，絕對定量轉錄(lu)組(zu)通(tong)過(guo)加入UMI （Unique Molecular Identifier），一種(zhong)特異序列標簽(qian)，來解決了擴(kuo)增重復問(wen)題。
在(zai)cDNA文庫擴增前對(dui)每一(yi)個cDNA片段加上特(te)異序(xu)列標(biao)簽（UMI），該(gai)標(biao)簽會隨cDNA序(xu)列一(yi)起擴增測(ce)序(xu)，即來(lai)自于(yu)PCR擴增的(de)序(xu)列會與(yu)原始(shi)序(xu)列帶有(you)相(xiang)同(tong)(tong)的(de)UMI，通過過濾帶有(you)相(xiang)同(tong)(tong)UMI的(de)重復(fu)序(xu)列還(huan)原RNA文庫中最原始(shi)的(de)RNA表達量(liang)，在(zai)組間(jian)基(ji)因表達相(xiang)對(dui)定量(liang)的(de)基(ji)礎上實現絕(jue)對(dui)定量(liang)。
UMI絕對(dui)定量實(shi)驗原理
絕(jue)對定量轉錄組測序技術優勢：
RNA起始量(liang)低，更適合(he)量(liang)少(shao)與珍(zhen)貴樣品；
基因表達水平的精(jing)準定量，避免(mian)低豐度基因丟失；
準確定量動植物中(zhong)寄(ji)生菌的轉(zhuan)錄本；
可區分(fen)天然重(zhong)復與擴增重(zhong)復，準(zhun)確識別可變剪切事件；
校正(zheng)擴增過程中出現(xian)的(de)堿基錯誤(wu)，使RNA編輯分析更為精準(zhun)?。
絕(jue)對定量(liang)轉錄組分析流程
項目流程圖
跟常規(gui)轉(zhuan)錄組測(ce)序(xu)項目相比，絕對定量轉(zhuan)錄組測(ce)序(xu)技術(shu)在實(shi)驗(yan)(yan)環節多了一(yi)(yi)(yi)(yi)步UMI的(de)添(tian)加，在分析(xi)(xi)環節多了一(yi)(yi)(yi)(yi)步UMI數據過濾與統計，其余的(de)分析(xi)(xi)內容和(he)常規(gui)轉(zhuan)錄組一(yi)(yi)(yi)(yi)樣(yang)哦！我(wo)們擁有(you)近10年高通量測(ce)序(xu)經驗(yan)(yan)，先進的(de)測(ce)序(xu)平臺，強大分數據處理服務(wu)器(qi)，經驗(yan)(yan)豐富(fu)的(de)實(shi)驗(yan)(yan)、技術(shu)與生信(xin)團隊，為(wei)您(nin)(nin)提供“售前咨詢→樣(yang)品(pin)提取→文庫構(gou)建→上機測(ce)序(xu)→數據分析(xi)(xi)→技術(shu)答疑”一(yi)(yi)(yi)(yi)套完整(zheng)的(de)的(de)服務(wu)，為(wei)您(nin)(nin)的(de)科研工作保(bao)駕護(hu)航。
部分(fen)分(fen)析內容展(zhan)示1
部分分析內容展(zhan)示2
需(xu)要了解(jie)更多，參考文獻來(lai)幫助：
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