2020-06-11
也(ye)許你很難想(xiang)象一(yi)片葉子(zi)、一(yi)塊肌肉、一(yi)管(guan)血液都經歷了什么，最后以核酸的(de)(de)(de)形式呈現。核酸的(de)(de)(de)提取是所(suo)有分(fen)子(zi)生物(wu)學(xue)研究(jiu)的(de)(de)(de)基礎，核酸提取的(de)(de)(de)質量、濃(nong)度的(de)(de)(de)多少對于(yu)下游(you)分(fen)子(zi)生物(wu)學(xue)實(shi)驗的(de)(de)(de)成敗(bai)起著關鍵的(de)(de)(de)作用，今天我們就說一(yi)說關于(yu)DNA提取的(de)(de)(de)那些事兒。
一(yi). DNA提取原則(ze) 1、保證DNA分子(zi)的完整(zheng)性 2、排除(chu)有機溶劑與金屬離(li)子的干(gan)擾 3、排除蛋白質(zhi)、多(duo)(duo)糖(tang)、多(duo)(duo)酚、脂類的(de)污染 4、獲得高(gao)純度的(de)核酸 5、方法操作簡便(bian)，穩定性強(qiang) 二. DNA有哪些 染色體(ti)DNA、線粒體(ti)DNA、葉綠體(ti)DNA、質粒DNA、病毒/噬菌體(ti)DNA等。 三. 樣(yang)本(ben)的收集保存 注：詳細操作可參見《派森諾樣品制備及質量要求》文件，可向當地銷售或技術支持索取。 四. DNA提取原理及方法 目(mu)前提取DNA的方(fang)法(fa)(fa)繁(fan)多，如CTAB法(fa)(fa)、SDS法(fa)(fa)、各(ge)種試劑盒等，但原理大(da)致相同(tong)，主要是裂解(jie)和(he)純化兩大(da)步驟。首先對樣品破壁裂解(jie)，采(cai)用機械力、化學(xue)試劑、酶等方(fang)法(fa)(fa)將DNA釋放出(chu)來，隨(sui)后(hou)去除蛋(dan)白質、糖、酚、金屬離子等雜質，再(zai)用無(wu)水(shui)乙醇、異丙醇沉淀或載體吸附DNA，之后(hou)洗滌溶(rong)解(jie)即可(ke)得到核(he)酸(suan)。 雖然原(yuan)理相似，但不同(tong)提(ti)取(qu)方(fang)法使用(yong)的試劑(ji)(ji)有很大差別(bie)，下面列舉出(chu)在提(ti)取(qu)過(guo)程中(zhong)，常用(yong)試劑(ji)(ji)的作用(yong)及原(yuan)理： 1、裂解相關試劑 （1）CTAB（十六烷基三甲基溴化銨）:一種(zhong)陽離子(zi)表(biao)面(mian)活(huo)性劑，在高鹽溶液(ye)中(zhong)(zhong)，CTAB可與蛋(dan)白(bai)質和中(zhong)(zhong)性多糖(tang)形(xing)成復(fu)合物(wu)而沉淀(dian)，但不能沉淀(dian)核(he)酸(suan)和酸(suan)性多糖(tang)，另外它還(huan)能保護DNA不受內源(yuan)核(he)酸(suan)酶(mei)的(de)降(jiang)解。 （2）SDS（十二烷基硫酸鈉）:一種陰離子(zi)去(qu)污(wu)劑，可使細胞(bao)膜(mo)崩(beng)解，與(yu)膜(mo)蛋白疏水部分(fen)結合并使其(qi)與(yu)膜(mo)分(fen)離，使蛋白變性(xing)。 （3）PVP(聚乙烯吡咯(ge)烷(wan)酮):是酚類(lei)化合(he)物(wu)的螯合(he)劑，可與多酚化合(he)物(wu)形(xing)成(cheng)(cheng)復合(he)體，使其不(bu)被氧化成(cheng)(cheng)醌類(lei)。 （4）β-巰基乙醇：抗氧(yang)化劑，有效地(di)防止酚(fen)(fen)氧(yang)化成(cheng)醌，避免褐變，使酚(fen)(fen)容易(yi)去(qu)除。 （5）蛋白酶K：用于生物樣品中(zhong)蛋白質的一般降解，將蛋白質降解成小(xiao)分(fen)子肽或氨基酸，使DNA分(fen)子分(fen)離出來。 2.純化相關試劑耗材 （1）苯酚：使(shi)蛋白質(zhi)變性，同時抑制了(le)DNase的降解(jie)作用。 （2）氯仿：克(ke)服酚(fen)的(de)缺點，加(jia)速(su)有機相與液(ye)相分層，去除(chu)核酸溶(rong)液(ye)中(zhong)的(de)跡量酚(fen)（酚(fen)易(yi)溶(rong)于氯仿中(zhong)）。 （3）異戊(wu)醇(chun)(chun)：少(shao)許異戊(wu)醇(chun)(chun)可以減少(shao)蛋白質變性操(cao)作過程(cheng)中產生的(de)氣泡，有助于分相，保持體系(xi)的(de)穩定。 （4）無水乙醇：沉(chen)淀DNA，不易(yi)沉(chen)淀鹽類等物質；異(yi)丙醇也可沉(chen)淀DNA，體積(ji)小時間(jian)短，但易(yi)沉(chen)淀鹽類物質。 （5）核(he)酸純化(hua)柱：采用(yong)硅膠(jiao)膜作為核(he)酸的(de)特異(yi)性吸附材料（高(gao)鹽低pH值結合(he)核(he)酸），同時(shi)去除其他雜質，可(ke)以最大程度地回收樣品中的(de)DNA（低鹽高(gao)pH值洗脫），可(ke)以用(yong)于各(ge)物種的(de)DNA提取。操作簡單(dan)、用(yong)時(shi)短、純度高(gao)。 （6）DNA提(ti)取磁珠：是一(yi)種核(he)心為(wei)四(si)氧化(hua)三鐵(tie)、表面修飾大量(liang)硅(gui)羥基的(de)磁性(xing)微球，能在高鹽(yan)、低pH條件下和溶液中的(de)核(he)酸(suan)通過疏水作用、氫鍵作用和靜電作用等發生特異性(xing)結合，而不與其它雜(za)質(zhi)（如蛋白）結合，可迅速從(cong)生物樣品中分(fen)離核(he)酸(suan)，操作安全簡單，非(fei)常有利于核(he)酸(suan)的(de)自動化(hua)和高通量(liang)提(ti)取。 五. 核酸的保存 短(duan)時(shi)間(jian)（24h內）可放(fang)(fang)置4℃保(bao)(bao)存(cun)(cun)，長期(qi)（24h以上）放(fang)(fang)置于-20℃進行保(bao)(bao)存(cun)(cun)，期(qi)間(jian)避免反復凍融。對于純度(du)不高(gao)、總量較少、完整度(du)不好的非(fei)高(gao)質(zhi)量核酸(suan)，還需盡(jin)早(zao)進行后續實驗(yan)，以防保(bao)(bao)存(cun)(cun)時(shi)間(jian)過長，DNA質(zhi)量更受(shou)影響(xiang)，進而影響(xiang)建庫和測序質(zhi)量。 以上為大家列舉了在提(ti)取過(guo)程中經(jing)常用到的試(shi)劑及原理(li)，給(gei)出(chu)了核酸(suan)保存的建議。要強調的是(shi)相同的原理(li)下，不是(shi)試(shi)劑的去(qu)污(wu)、裂解效(xiao)果越好就(jiu)用的越多，還是(shi)要在實(shi)際提(ti)取過(guo)程中，根(gen)據提(ti)取材料的不同、提(ti)取結果的差(cha)異(yi)，靈活調整實(shi)驗方案。 目前(qian)派(pai)森諾(nuo)有著自己一套科學完整的(de)提(ti)取檢測(ce)流程，申請并(bing)通過了多(duo)項提(ti)取專利(li)，尤其是(shi)針對(dui)多(duo)糖、多(duo)酚、多(duo)次生代(dai)謝(xie)物等(deng)復雜樣(yang)本(ben)有獨(du)特的(de)提(ti)取方法。后續也將和大家分享疑難樣(yang)本(ben)的(de)提(ti)取心得，希望能給您的(de)科研項目帶來幫助~~
