2020-07-27
蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)（protein）是構成細胞(bao)的(de)(de)(de)基本有(you)機大分子，生命活動的(de)(de)(de)主要(yao)(yao)承擔者(zhe)。機體中的(de)(de)(de)每一個細胞(bao)和所有(you)重要(yao)(yao)組成部分都有(you)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)參與。面對(dui)五花八門的(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)檢測(ce)產品，你知道選擇什么方法(fa)契(qi)合你的(de)(de)(de)研究需求嗎？這就為大家帶來常(chang)見(jian)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)產品的(de)(de)(de)分類與介紹，拿走(zou)不謝~
一、蛋白組的定量研(yan)究
需求：篩選不同實(shi)驗(yan)組別之間(jian)含量(liang)差異表(biao)達的蛋白(bai)質(zhi)。
定量(liang)蛋(dan)(dan)(dan)白組學研究思路(lu)可以參考(kao)轉錄組，只不過我們(men)的(de)研究目的(de)從看基因(yin)表達量(liang)變成了基因(yin)編碼蛋(dan)(dan)(dan)白的(de)表達量(liang)，定量(liang)蛋(dan)(dan)(dan)白組學分為標記定量(liang)與非標記定量(liang)兩種類型。
1、iTRAQ與TMT標(biao)記(ji)定量蛋白組學
標(biao)(biao)記(ji)(ji)定量蛋(dan)白(bai)組學就是(shi)利用多(duo)肽(tai)體外標(biao)(biao)記(ji)(ji)技術，將蛋(dan)白(bai)酶解后的(de)肽(tai)段添(tian)(tian)加上標(biao)(biao)簽(qian)，可(ke)以對一個(ge)(ge)(ge)樣(yang)品添(tian)(tian)加一個(ge)(ge)(ge)標(biao)(biao)簽(qian)，如(ru)果樣(yang)本數目太多(duo)，也(ye)可(ke)以一個(ge)(ge)(ge)處理(li)組添(tian)(tian)加相(xiang)同(tong)的(de)標(biao)(biao)簽(qian)。這樣(yang)帶有不同(tong)標(biao)(biao)簽(qian)的(de)樣(yang)品可(ke)以被(bei)混合上樣(yang)檢測，隨著(zhu)16標(biao)(biao)的(de)出現，現在就可(ke)以同(tong)時(shi)標(biao)(biao)記(ji)(ji)16個(ge)(ge)(ge)樣(yang)品，16個(ge)(ge)(ge)樣(yang)品混合上樣(yang)，由于混合樣(yang)品較(jiao)復雜，所以標(biao)(biao)記(ji)(ji)定量實(shi)驗過程中會有分級操(cao)作。iTRAQ與(yu)TMT是(shi)不同(tong)公(gong)司研發的(de)標(biao)(biao)簽(qian)。
iTRAQ：4標、8標，美國應(ying)用(yong)生(sheng)物系統公司(si)ABI。
TMT：2標(biao)、6標(biao)、10、16標(biao)，美國Thermo Scientific公司。
2、label-free非(fei)標(biao)記蛋白組學
顧名思(si)義就(jiu)是不添(tian)加(jia)標(biao)簽(qian)標(biao)記(ji)的(de)蛋白組學，因為沒有標(biao)簽(qian)可以(yi)區分樣(yang)(yang)本(ben)，所以(yi)樣(yang)(yang)品(pin)需要一個(ge)一個(ge)進液(ye)質聯用(yong)系統，采用(yong)在樣(yang)(yang)品(pin)間穿插QC樣(yang)(yang)本(ben)（質控樣(yang)(yang)本(ben)：所有待測樣(yang)(yang)品(pin)的(de)取(qu)等量混合）的(de)方式，看整個(ge)實驗過程中儀器的(de)穩定(ding)性。
同樣是檢測(ce)樣本(ben)中整個蛋白組的組間(jian)含量差異，那(nei)么(me)標(biao)記定(ding)量與非標(biao)定(ding)量到底該怎么(me)選呢？請參考：.
二、蛋白質定性研究
需求(qiu)：所提供樣本(ben)（膠條、膠點(dian)、溶液）中是否含(han)有感興趣(qu)的蛋白或者具體含(han)有哪些蛋白。
采用蛋(dan)白(bai)質(zhi)全(quan)譜分析（也(ye)可(ke)稱為質(zhi)譜shotgun分析）的方法，研究(jiu)對象(xiang)是可(ke)以(yi)是膠(jiao)點(dian)、膠(jiao)條(tiao)(tiao)、或樣(yang)本提取物(wu)，其目(mu)的在于鑒定肽和(he)蛋(dan)白(bai)質(zhi)分子(zi)是哪些(xie)。例如：通過膠(jiao)圖發現樣(yang)本間差(cha)異蛋(dan)白(bai)條(tiao)(tiao)帶(dai)，可(ke)以(yi)將膠(jiao)點(dian)切出、鑒定該膠(jiao)點(dian)是哪些(xie)蛋(dan)白(bai)。
三(san)、蛋白修飾組(zu)學研究
需(xu)求：篩選不同實(shi)驗組別之間(jian)具有特定修(xiu)飾基團含量(liang)差異表達(da)的蛋白質。
蛋白(bai)的(de)化學(xue)修(xiu)飾(shi)(shi)：凡通過活(huo)性基(ji)團的(de)引入或去除，而使蛋白(bai)組一級結構發生改(gai)變的(de)過程(cheng)。有些情況(kuang)下(xia)，化學(xue)結構的(de)改(gai)變并不(bu)會影響(xiang)蛋白(bai)質的(de)活(huo)性，但多數情況(kuang)下(xia)，蛋白(bai)質結構的(de)改(gai)變會導(dao)致蛋白(bai)活(huo)性及其他(ta)方(fang)面的(de)變化。基(ji)團的(de)引入會引起(qi)蛋白(bai)分子量的(de)改(gai)變，基(ji)于此原理可以通過液質聯用檢測不(bu)同的(de)蛋白(bai)修(xiu)飾(shi)(shi)類型。
目(mu)前研究(jiu)較多的(de)蛋(dan)白修飾(shi)(shi)類(lei)型有：磷(lin)酸化(hua)(hua)、乙(yi)酰(xian)化(hua)(hua)、泛素化(hua)(hua)、甲基(ji)化(hua)(hua)等(deng)。各類(lei)修飾(shi)(shi)的(de)生物學意(yi)義，在此不詳細(xi)描述了，大家可以(yi)查閱資料學習。
四、目標(biao)蛋白定量驗證
需求：已通(tong)過(guo)組學或其他方式篩選出關鍵蛋白(bai)，對關鍵蛋白(bai)進行定量驗(yan)證(zheng)。
目標蛋白(bai)定量分析目前給大家介紹(shao)常見的三種
1、PRM（平行(xing)(xing)反(fan)應監視，parallel reaction monitoring）是(shi)一種基于高分辨、高精度質(zhi)(zhi)譜的離(li)子監視技術，能夠(gou)對(dui)目標蛋(dan)白質(zhi)(zhi)、目標肽段(duan)（如發(fa)生翻譯后修飾的肽段(duan)）進行(xing)(xing)選擇性檢測，從而實現對(dui)目標蛋(dan)白質(zhi)(zhi)/肽段(duan)進行(xing)(xing)相對(dui)或絕對(dui)定量。
2、蛋(dan)(dan)白質印跡(ji)法（免疫(yi)印跡(ji)試驗）即Western Blot，其基(ji)本原理(li)(li)是通(tong)(tong)過(guo)(guo)特異(yi)性抗體結合目(mu)標蛋(dan)(dan)白，再通(tong)(tong)過(guo)(guo)二(er)抗對(dui)凝膠電(dian)泳處(chu)理(li)(li)過(guo)(guo)的細胞或(huo)生物組織樣品進行顯色。通(tong)(tong)過(guo)(guo)分(fen)析著色的位置和著色深度獲得(de)特定蛋(dan)(dan)白質在所分(fen)析的細胞或(huo)組織中表達情況(kuang)的信息。
3、ELISA是酶聯免(mian)疫吸附(fu)測(ce)定法 (Enzyme-Linked Immune Sorbent Assay) 的簡稱。它是在(zai)免(mian)疫酶技術(shu)的基礎上發(fa)展起來(lai)的一種新(xin)型的免(mian)疫測(ce)定技術(shu) 。
以上3種方法(fa)的(de)總結：PRM依賴高(gao)分辨率質譜，結果(guo)更精準，操作更簡單，且可以應(ying)用(yong)于(yu)(yu)多種非模式物(wu)種。缺(que)點是它需要(yao)通過檢(jian)測到的(de)特異肽段來區分不(bu)同(tong)(tong)蛋(dan)白(bai)且定(ding)量，受(shou)酶切，肽段長短，同(tong)(tong)源性等因素影響，并不(bu)能保證(zheng)獲得所有目標蛋(dan)白(bai)的(de)定(ding)量信息。WB的(de)方法(fa)雖(sui)然對于(yu)(yu)大(da)部分實驗室來說，可以自行實施(shi)，但屬于(yu)(yu)半定(ding)量，且依賴高(gao)質量的(de)特異性的(de)商業(ye)化抗體。Elisa定(ding)量常應(ying)用(yong)于(yu)(yu)醫學的(de)血清(qing)，體液(ye)等樣本的(de)檢(jian)測。
以上(shang)就是常見的(de)(de)蛋白研究方(fang)法的(de)(de)介紹，我(wo)們(men)還可以提供更(geng)多的(de)(de)個性化蛋白實驗(yan)與檢測，有(you)蛋白研究的(de)(de)想(xiang)法記得找小派君哦，我(wo)們(men)還有(you)更(geng)多的(de)(de)干貨會持續分享給大家~
