2020-08-06
在“”文(wen)章中，我們簡單介紹了DNA提取原則和(he)原理等(deng)。
但由于(yu)自(zi)然(ran)界物(wu)種(zhong)(zhong)豐富(fu)，老師們研(yan)究物(wu)種(zhong)(zhong)的(de)(de)組織部位、生(sheng)(sheng)理生(sheng)(sheng)化特性(xing)各異，進而增加了DNA提取的(de)(de)難度。糖類、酚類、蛋白(bai)、油脂、次生(sheng)(sheng)代謝物(wu)等都(dou)會影響DNA的(de)(de)得率(lv)和完(wan)整性(xing)。
今天我(wo)們就(jiu)目前遇(yu)到的部(bu)分困(kun)難(nan)樣(yang)本展開簡(jian)短(duan)的總結(jie)和結(jie)果展示。
一、不同類型難提取(qu)樣(yang)本特點(dian)分(fen)析(xi)
二、幾種難提取樣本案(an)例展示
1.薔薇科植物、真菌
主(zhu)要問(wen)題：多(duo)糖、多(duo)酚、多(duo)次(ci)生(sheng)代謝(xie)物(wu)。
改良方(fang)案：公司(si)擁有(you)(you)(you)發明專利(li)的(de)(de)“多糖多酚植物基因組的(de)(de)提(ti)取方(fang)法(fa)”，能有(you)(you)(you)效(xiao)去除多糖多酚、得到高(gao)純度高(gao)質量的(de)(de)DNA。利(li)用(yong)改良真(zhen)菌CTAB法(fa)，對(dui)不(bu)同物種的(de)(de)真(zhen)菌提(ti)取會更有(you)(you)(you)針對(dui)性、效(xiao)率更高(gao)。
提(ti)取(qu)結果：(使用多糖多酚提(ti)取(qu)法進行提(ti)取(qu)，并對8、14號樣本(ben)進行針對性優(you)化）
圖1 秋海棠(tang)科不同物(wu)種提取結(jie)果
圖2 針(zhen)對特(te)殊物種進行再次優化
圖3 多次(ci)生代謝物真菌（攀枝花白塊菌）
2.太歲
主要問題(ti)：是(shi)由粘菌、細菌和真菌三類菌構(gou)成的一種稀有(you)的聚合體，研究成果(guo)較(jiao)少。樣(yang)本取(qu)樣(yang)部(bu)位不確(que)定(ding)，雜質多，得率低。
改(gai)良(liang)方案：實(shi)驗室針對已知物種(zhong)特(te)性，以沉(chen)淀法(fa)為基(ji)礎，通(tong)過多次改(gai)良(liang)，總(zong)結出(chu)一種(zhong)適用于太歲的特(te)殊提取法(fa)，有效的提高了DNA的質量(liang)。
提取結果：
圖4 太(tai)歲(sui)優化前后(hou)對比
3.孢子、堅(jian)強芽孢桿菌等(deng)
主(zhu)要問題：細(xi)胞壁(bi)由一(yi)層(ceng)較厚(10-50nm)的含胞壁(bi)酸的肽聚糖構成，一(yi)般(ban)方法不易破壁(bi)，得率低，易降解。
改良方案：選(xuan)擇合適的研(yan)磨條件(jian)，加(jia)大裂(lie)解力(li)度，添加(jia)輔助破壁的酶類(lei)試(shi)劑。
提(ti)取結果(guo)：
圖5 兩種厚壁物(wu)種CTAB法提取結(jie)果
圖6 兩種厚(hou)壁物(wu)種改良(liang)CTAB法提取結(jie)果
4.小型(xing)昆蟲
主(zhu)要問題：個體小，角(jiao)質較(jiao)豐富(fu)、組織萎縮(suo)較(jiao)嚴重。
改良方案：實驗室有相(xiang)對應的昆(kun)蟲(chong)組織提取法。
提取結果：
圖7 不同物種、不同保存方(fang)式提取結果(guo)
5.水(shui)母
主要(yao)問題：身體主要(yao)成(cheng)分是(shi)水，有(you)很厚的(de)中膠層，部分物種還含有(you)大(da)量的(de)蛋白質(zhi)，核(he)酸含量較低。
改良方案：實驗室(shi)對原有CTAB法進行了針(zhen)對性的優化(hua)，增(zeng)加了對樣品的前(qian)處理，效果明顯。
提取結果：
圖8 一種霞水(shui)母(mu)科普通(tong)提取（左）和優化(hua)后（右）結果
以上為(wei)大家列舉(ju)了(le)派森諾實驗室(shi)對(dui)幾種困難(nan)樣本(ben)的改良結果。在多糖菌(jun)類、微量樣本(ben)、發酵樣本(ben)、非常見物(wu)種等(deng)方面(mian)，也創(chuang)新出了(le)很多高(gao)效的針對(dui)性方法(fa)，就不一一給大家列舉(ju)了(le)。
希望(wang)我們方法的多樣性及靈(ling)活性能給您的科研項目(mu)帶來(lai)幫助~~
