2020-11-30
關(guan)于DIA，你是否已經聽(ting)了太多次，但依舊似懂非懂，腦袋一團亂麻？
今天小派就給大家介(jie)紹一下蛋白質(zhi)組質(zhi)譜檢(jian)測(ce)技(ji)術(shu)— DIA(數據(ju)非依(yi)賴采集技(ji)術(shu)，data-independent acquisition)。
研究基因組(zu)(zu)和(he)轉錄(lu)組(zu)(zu)學(xue)的(de)老師也不要(yao)錯過哦，畢竟(jing)蛋(dan)白(bai)質才(cai)(cai)是生物(wu)功(gong)能的(de)主要(yao)體現者與執行者，才(cai)(cai)能更(geng)直(zhi)接闡明生命在生理(li)或病(bing)理(li)條件下的(de)變化機制。
什么是DIA？技(ji)術(shu)原理？
DIA（Data independent acquisition）是一項(xiang)全新的(de)、全息式數(shu)據(ju)非依賴(lai)性采集(ji)定(ding)量技術，可以依次對特定(ding)質量范圍內的(de)所(suo)有母(mu)(mu)離(li)子進行碎裂，采集(ji)所(suo)有母(mu)(mu)離(li)子的(de)碎片離(li)子信息進行蛋白(bai)定(ding)性和(he)定(ding)量。
DIA技術(shu)(shu)是先利用常規DDA質(zhi)(zhi)譜(pu)(pu)(pu)檢測技術(shu)(shu)分(fen)(fen)析建立圖(tu)譜(pu)(pu)(pu)庫，之后采(cai)用DIA方法進(jin)行質(zhi)(zhi)譜(pu)(pu)(pu)數據(ju)采(cai)集(ji)，從而(er)實現(xian)對(dui)樣品(pin)中蛋(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)的(de)定性及(ji)定量(liang)，不同于傳統的(de)DDA技術(shu)(shu)，DIA技術(shu)(shu)將整個(ge)質(zhi)(zhi)譜(pu)(pu)(pu)掃(sao)描質(zhi)(zhi)量(liang)范圍分(fen)(fen)為若干(gan)小窗口(kou)，依次對(dui)每個(ge)窗口(kou)的(de)所有離(li)子(zi)進(jin)行碎裂，使其能夠對(dui)掃(sao)描區間內(nei)的(de)所有肽段離(li)子(zi)進(jin)行高(gao)(gao)速一(yi)級MS掃(sao)描，再進(jin)行二(er)級MS/MS分(fen)(fen)析，該(gai)技術(shu)(shu)無(wu)需(xu)指定目標肽段，可以無(wu)遺漏地獲得樣本中所有離(li)子(zi)的(de)全部碎片(pian)信息，數據(ju)利用度大(da)(da)大(da)(da)提高(gao)(gao)。
DIA技術流程？
DIA技(ji)術作為一項新(xin)技(ji)術，還(huan)有需要完(wan)善(shan)的地(di)方。技(ji)術難點主要在于二級譜圖成分復雜(za)，生信分析(xi)較為困難。因而，目前要想采(cai)用(yong)DIA技(ji)術，必須先(xian)利(li)用(yong)常規DDA質(zhi)譜檢測技(ji)術分析(xi)建(jian)立(li)圖譜庫，之后采(cai)用(yong)DIA方法進行(xing)質(zhi)譜數據采(cai)集，從(cong)而實現對樣品中蛋白(bai)質(zhi)的定性及定量。
DIA技(ji)術流程
DDA與(yu)DIA的區(qu)別(bie)？
DDA二級(ji)質(zhi)譜只能夠采(cai)集一級(ji)譜圖信(xin)號最強的(de) Top20 的(de)信(xin)息(xi)，所以(yi)說會(hui)造(zao)成信(xin)息(xi)遺(yi)(yi)漏。DIA將質(zhi)譜整個(ge)(ge)全(quan)(quan)掃(sao)描范圍分(fen)為(wei)若干個(ge)(ge)窗(chuang)口，高速、循環地(di)對每個(ge)(ge)窗(chuang)口中的(de)所有離(li)(li)子進行選(xuan)擇(ze)、碎裂和檢測，因此可以(yi)無遺(yi)(yi)漏地(di)獲(huo)得樣本中所有離(li)(li)子的(de)全(quan)(quan)部(bu)碎片信(xin)息(xi)，數據(ju)利用(yong)度大大提高，缺失值更少。因此，DIA技(ji)術更適合大量樣本、復雜(za)體系的(de)蛋白檢測。
DIA技術優勢？
相對于傳統的(de)是DDA，DIA具(ju)有如下(xia)技術優勢(shi)：
● 全(quan)景式掃描，數(shu)據無(wu)遺漏，蛋白質覆蓋(gai)率(lv)、定量準確性高(gao)
● 樣本無需分餾分上機，極大(da)縮短了每個樣品(pin)的檢(jian)測周期；不受樣本量限制，可用于(yu)大(da)規(gui)模樣本數量檢(jian)測
● 相比于DDA模式，DIA缺失值更少，鑒定(ding)與(yu)定(ding)量結(jie)果(guo)的可重復性更高，數據可回(hui)溯
DIA應用領域？
DIA主(zhu)要用(yong)于大(da)規模尋找差異蛋白和大(da)樣本量的(de)定量研究，并且因為DIA在鑒定蛋白數目、重復性(xing)、定量準(zhun)確性(xing)等方面都(dou)優(you)于DDA，數據利用(yong)度(du)大(da)大(da)提高，因此也非常適合應用(yong)于生(sheng)物標(biao)記物的(de)篩選(xuan)。
