2023-11-30
一、股骨結構簡介
股骨(gu)(gu)(gu)又稱為(wei)大腿骨(gu)(gu)(gu)，是人全身中最(zui)長的(de)長骨(gu)(gu)(gu)，分一體兩端，也是小鼠骨(gu)(gu)(gu)骼(ge)系統中最(zui)大的(de)骨(gu)(gu)(gu)頭之一，連接著(zhu)髖關(guan)(guan)節與膝關(guan)(guan)節。其近側端存(cun)在圓形股骨(gu)(gu)(gu)頭，下方為(wei)狹細的(de)股骨(gu)(gu)(gu)頸，股骨(gu)(gu)(gu)頸遠側還(huan)有(you)兩個大的(de)突起分別為(wei)大轉(zhuan)子(zi)和小轉(zhuan)子(zi)提供肌(ji)肉附(fu)著(zhu)處，繼續下行(xing)為(wei)股骨(gu)(gu)(gu)體，末端向左(zuo)右膨大，形成內(nei)外側髁。
二、小鼠股骨組織解離方案
小鼠股骨
1.實驗試劑配置
（1）適當體(ti)積復合酶(mei)液
（2）含2% FBS的DPBS，冰上預冷
（3）完全培養基：含10% FBS的DMEM
2.預處理
從組(zu)織(zhi)(zhi)保(bao)存液(ye)中取(qu)出組(zu)織(zhi)(zhi)樣本，放(fang)入預冷的 DPBS中清洗一到(dao)兩遍，使用(yong)眼(yan)科剪剪去近遠兩端暴露內腔，借助(zhu)一次性醫用(yong)注射器吸取(qu)DMEM沖洗內腔，收(shou)集(ji)骨髓（若(ruo)要(yao)收(shou)集(ji)髓系細胞，可進行(xing)后續處理），剩余組(zu)織(zhi)(zhi)剪碎。
3.初次消化
將剪碎的組織轉移至(zhi)復(fu)合(he)酶(mei)液中(zhong)，置于37℃水(shui)浴中(zhong)振蕩消化30-40 min，過40um細胞篩收集懸液，置于冰上暫存。
4.二次消化
將上步過篩(shai)處理后剩余組織(zhi)轉入(ru)新管(guan)復合酶液(ye)繼(ji)續(xu)消化30min，過40um細胞(bao)篩(shai)收集，置于冰上暫存。
5.三次消化
重復(fu)上步，計數儀測定細胞(bao)懸液(ye)濃度，無明顯細胞(bao)量(liang)產出時，終止消化。
6.清洗
將所有細(xi)胞懸液合并后4℃ 400×g 離心5 min，棄上清，加入(ru)適當體積DPBS(含2% FBS)重懸沉淀，進行熒光計數(shu)及臺(tai)盼藍鏡檢。
（若離心(xin)后(hou)發現底部沉淀呈(cheng)現紅色，需要進行裂紅處理）
三、結果展示
鏡檢結果
背景干凈，形態完整。
活性、濃度檢測
83%活率(lv)，濃(nong)度730個(ge)cells/ul，總(zong)量30W以上。
數據質控
上圖是(shi)下(xia)機數(shu)據cellranger質控結果，細胞捕獲數(shu)及基因數(shu)都(dou)符(fu)合前期(qi)需求。
