2024-01-15
一、股骨結構簡介 ?股骨(gu)又稱為(wei)大腿骨(gu)，是人(ren)全(quan)身(shen)中最長的長骨(gu)，分一體(ti)兩端(duan)，其近(jin)側端(duan)存(cun)在圓形股骨(gu)頭(tou)(tou)；股骨(gu)頭(tou)(tou)極(ji)為(wei)重要，人(ren)的直立行走、活動(dong)勞(lao)動(dong)都要依靠股骨(gu)頭(tou)(tou)的支撐作用。之前小派與(yu)大家(jia)分享了小鼠股骨(gu)的解離(li)方法，相信大家(jia)肯定都收獲頗(po)豐吧！今(jin)天繼續給大家(jia)帶(dai)來(lai)人(ren)的股骨(gu)頭(tou)(tou)解離(li)實驗方案及結果展示。 二(er)、人股骨頭組織解離方案 ? 人股骨頭組(zu)織 1、實驗試劑配置 （1）適當體積復合酶液 （2）含2% FBS的DPBS，冰(bing)上預(yu)冷 （3）完全培(pei)養基：含10% FBS的DMEM 2、預處(chu)理 從組織保存液中取出組織樣本(ben)，放入預(yu)冷的 DPBS中清(qing)洗一到兩遍(bian)，使(shi)用眼科剪將組織盡可能的剪切成1~2mm3，用預(yu)冷的DPBS清(qing)洗組織塊。 3、初(chu)次(ci)消化 將剪碎(sui)的組織轉移至復合酶液中(zhong)，置于(yu)37℃水浴中(zhong)振(zhen)蕩(dang)消化(hua)(hua)5 min，完全培養基終止(zhi)消化(hua)(hua)，過30um細胞篩收(shou)集懸液，置于(yu)冰上暫存。 4、二(er)次消化(hua) 將上步過(guo)篩(shai)處(chu)理(li)后剩余組織轉入新管復(fu)合(he)酶液繼續消化20min，完(wan)全(quan)培(pei)養基終(zhong)止消化，過(guo)30um細胞(bao)篩(shai)收集，置于冰上暫存(cun)。 5、三次消(xiao)化 重復上步，計數儀測定細胞懸液濃(nong)度(du)，無明顯細胞量產出時，終止消化。 6、清洗 將所有細胞懸液(ye)合并后4℃ 400×g 離心5 min，棄上清，加(jia)入(ru)適當體積DPBS(含2% FBS)重懸沉淀，進行熒(ying)光(guang)計數及臺盼藍鏡檢(jian)。 （若(ruo)離心后發現底部沉(chen)淀(dian)呈(cheng)現紅色，需要進(jin)(jin)行裂紅處理。若(ruo)出現活率(lv)不足80%，需要進(jin)(jin)行去(qu)除死細(xi)胞(bao)處理。若(ruo)出現碎片(pian)較多，則需要進(jin)(jin)行去(qu)碎片(pian)操作。） 三、結(jie)果展示 ?鏡檢結果 背(bei)景干凈，形態完整。 活性、濃度檢測 94%活率(lv)，濃度(du)645個cells/ul，總量20W以上。 數據質控 上圖(tu)是下機(ji)數據cellranger質控(kong)結(jie)果，細胞(bao)捕獲(huo)數及基因數都(dou)符(fu)合(he)前期(qi)需求(qiu)。
