2024-02-29
細(xi)胞(bao)外(wai)(wai)囊泡(pao)(pao)（extracellular vesicles, EVs）是(shi)由(you)細(xi)胞(bao)分(fen)泌(mi)的(de)具有(you)(you)脂質(zhi)(zhi)雙分(fen)子(zi)層(ceng)結構的(de)囊泡(pao)(pao)，攜帶DNA、RNA、蛋白質(zhi)(zhi)和脂質(zhi)(zhi)等生(sheng)物(wu)活性分(fen)子(zi)，是(shi)細(xi)胞(bao)間通訊、疾病(bing)診斷和預后循環生(sheng)物(wu)標(biao)志物(wu)的(de)重(zhong)要載體(ti)(ti)(ti)。其(qi)分(fen)為外(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)（Exosome)、核(he)外(wai)(wai)顆粒體(ti)(ti)(ti)（Ectosome）和凋亡小體(ti)(ti)(ti)（Apoptotic bodies）3種(zhong)(zhong)亞型，其(qi)中(zhong)外(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)是(shi)幾乎所有(you)(you)細(xi)胞(bao)均可(ke)釋放的(de)、直徑(jing)約30-150 nm的(de)細(xi)胞(bao)外(wai)(wai)囊泡(pao)(pao)（Extracellular vesicle, EV），由(you)細(xi)胞(bao)內(nei)多泡(pao)(pao)體(ti)(ti)(ti)（multivesicular body，MVB）與(yu)(yu)細(xi)胞(bao)膜融合后，釋放到細(xi)胞(bao)外(wai)(wai)基質(zhi)(zhi)中(zhong)。不同來(lai)源的(de)細(xi)胞(bao)生(sheng)成(cheng)外(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)的(de)速率、大(da)小、組分(fen)均有(you)(you)異質(zhi)(zhi)性。近(jin)年(nian)來(lai)，多項(xiang)研究證實RNA是(shi)EVs參(can)與(yu)(yu)調(diao)控多種(zhong)(zhong)生(sheng)理(li)和病(bing)理(li)過程的(de)關鍵功能分(fen)子(zi)，在作(zuo)為生(sheng)物(wu)標(biao)志物(wu)方面也有(you)(you)著巨大(da)的(de)臨床應用潛力。傳統(tong)的(de)檢(jian)測(ce)EV組成(cheng)的(de)方法(fa)，如(ru)免(mian)疫印記(ji)（Western Blotting）、聚合酶鏈式反應（PCR）和RNA-seq，通常將大(da)量EVs作(zuo)為一(yi)個整體(ti)(ti)(ti)進行分(fen)析，單(dan)(dan)個EV的(de)分(fen)子(zi)組成(cheng)、單(dan)(dan)個EV在群體(ti)(ti)(ti)中(zhong)的(de)異質(zhi)(zhi)性信息(xi)會被(bei)掩(yan)蓋(gai)。因此，在單(dan)(dan)個EV水平(ping)上(shang)研究其(qi)組成(cheng)異質(zhi)(zhi)性具有(you)(you)重(zhong)要意義。故派森諾生(sheng)物(wu)基于10x Genomics平(ping)臺研發(fa)出一(yi)種(zhong)(zhong)全新的(de)單(dan)(dan)外(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)轉(zhuan)錄組測(ce)序(xu)產品，可(ke)在單(dan)(dan)EV水平(ping)探(tan)究EVs轉(zhuan)錄組特征及(ji)其(qi)異質(zhi)(zhi)性。
下面請隨(sui)小派一(yi)起看(kan)看(kan)單外泌體(ti)轉錄(lu)組(zu)技術實(shi)驗與(yu)分析方(fang)案(an)吧~
單外泌體轉錄組測序實驗(yan)方案 單外泌(mi)體轉錄組(zu)測(ce)序，即在(zai)制(zhi)備質控(kong)合(he)格的單外泌(mi)體懸液(ye)后，依托10x Genomics平臺(tai)形(xing)成油包水結構，構建文庫進行高通量測(ce)序的技術。實驗流(liu)程如下： ※ 收集(ji)后的(de)外泌(mi)體的(de)質(zhi)控(kong)要(yao)求 1、電鏡檢(jian)測要(yao)求 視野(ye)中(zhong)多(duo)數(shu)為外(wai)泌體顆粒（視野(ye)內(nei)外(wai)泌體占比80～90%） 2、粒徑及濃度要求 濃度：≥1x10^9個/ml，粒徑主要集中在30～150nm 參考如下(xia)： 3、外泌體核酸提取質檢要求 無細(xi)胞轉錄組污染，主峰在25～200nt之(zhi)間，18S/28S/16S不起峰，2100檢(jian)測濃度≥0.5ng/ul 參考如下： ※ 送樣要(yao)求(qiu) ?富集好的(de)外泌體 體積(ji)≥200ul；濃(nong)度：≥1x10^9個/ml 寄(ji)(ji)送(song)條件：干冰寄(ji)(ji)送(song)。 ?原樣寄送要求 血清(qing)/血漿建議送(song)樣量(liang)≥5 mL；細(xi)胞上清(qing)建議送(song)樣量(liang)≥50 mL；尿液建議送(song)樣量(liang)≥100mL；其他(ta)樣本類型送(song)樣建議可具體咨詢。 寄(ji)送條(tiao)件：干冰寄(ji)送。
單外泌(mi)體轉錄組測(ce)序分析方案 依據(ju)外泌體大小遠遠小于(yu)細胞且內部RNA含(han)量較低的自身特點，10x Genomics平臺上的Cell Ranger的call cell算(suan)法無法從背景中區(qu)分(fen)EV，分(fen)析(xi)方(fang)案采用了自適應閾值的CB2算(suan)法，有效區(qu)分(fen)了真實EVs和背景EVs，具體分(fen)析(xi)流(liu)程(cheng)如下： 部分(fen)分(fen)析結(jie)果展示
派森諾生物提(ti)供全(quan)套的單外泌體轉錄組(zu)學實驗與分析方案，開啟了外泌體研究領(ling)域的新方向，助力國自然(ran)沖刺！
