2023-08-21
《Frontiers in Cellular Infection Microbiology》 影響因子:5.7
前言 近日,上海交通大學在環醫學領域的《Frontiers in Cellular Infection Microbiology》發表新研究成果!本研究分離出一株一Xoc野生型菌株RS105表型出明顯拮抗活性的B. velezensis 504,揭示了B. velezensis對BLS潛在的生物防治機制,并發現該菌是一種多功能植物益生菌。 本研(yan)究(jiu)的細菌基(ji)因組(zu)(zu)完(wan)成(cheng)圖和轉錄組(zu)(zu)測(ce)序(xu)和分析由(you)上海派森諾生(sheng)物科技股份有限公司(si)完(wan)成(cheng)。
研究背景
水稻是世界重要的主要作物,但水稻的穩定生產受到各種病害的威脅,如稻瘟病病菌(X. oryzae pv)和水稻細菌性條紋病(BLS)。目前,對BLS的控制主要依靠化學藥劑,這些殺菌劑的使用不僅容易引起植物毒性,使病原菌產生耐藥性,而且破壞生態環境。因此,生物防治措施得到大力推廣,從農業生態環境中篩選拮抗微生物防治BB和BLS的研究已成為一個重要的研究方向。此前研究分離并鑒定了一種對Xoc野生型菌株RS105表現出明顯的拮抗活性的菌株B.velezensis 504。在本研究中完成了該菌的全基因組測序,并與相近的B. velezensis菌株進行了比較基因組分析和轉錄組分析。
研究材料與方法
1.實驗材料 菠菜根際土壤樣品中分離到B.velezensis 504 2.測序平臺 Illumina +Pacbio 3.分析內容 細菌(jun)基因組(zu)完成(cheng)圖測(ce)序(xu)、ANI分析(xi)、泛基因組(zu)分析(xi)、Antismash分析(xi)、轉錄組(zu)測(ce)序(xu)等。
研究結果
B. velezensis 504基因組特征及比較基因組學分析
此前從中國福建省三明市西陽村菠菜根際土壤樣品中分離出對Xoc具有顯著拮抗活性的菌株504,16S rRNA序列比對表明該菌屬于B. velezensis。對該菌進行高通量測序發現其染色體長度為3,905,813bp,GC含量為46.60%,預測得到3853個基因、27個rRNA基因、86個tRNA、217個其他非編碼RNA;質粒大小為8,564bp,GC含量為39.86%。 圖1 B. velezensis 504基因組圈圖和比較基因組分析 ANI分析發現B. velezensis 504與FZB42之間的ANI值分別為97.60%和97.77%,504與SQR9之間的ANI值分別為97.56%和97.75%。結果表明,504與FZB42和SQR9之間的ANI值大于95%。504與其他芽孢桿菌單種的ANI值均低于95%的種界閾值,表明504屬于B.velezensis,這與16S rRNA測序和比對得到的結果一致。 圖2 ANI分析結果 對B. velezensis 504、FZB42和SQR9的全基因組共線性分析表明,大部分基因高度同源,但也存在翻轉、轉座等基因重排現象,且B. velezensis 504與FZB42的相似度高于SQR9;基因家族分析結果顯示這三個基因組有3306個共有基因,并且504具有280個特有基因;Antismash分析發現B. velezensis 504基因組包含14個候選基因簇,其中大乳酸素H、桿菌烯、風霉素、桿菌素、艱難梭菌素和桿菌素合成中的6個簇與B. velezensis FZB42具有100%的同源性,故推測艱難梭菌素和桿菌溶素是B. velezensis 504拮抗Xoc RS105的主要胞外活性分子。 B. velezensis 504比較轉錄組分(fen)析 為了探究B. velezensis 504對Xoc RS105抑菌作用的分子機制,首先測定了Xoc RS105對B. velezensis 504 CFSs的轉錄應答,并與人工hrp誘導培養基XOM3的轉錄應答進行了比較。結果發現在6、12和24 h時,分別觀察到2,269、1,931和2,209個Xoc RS105溫度對B. velezensis 504的CFSs有響應,RT-PCR檢測的基因表達水平與處理后6、12、24 h時RNA-Seq檢測的變化一致,表明轉錄組結果的可靠性。同時比較轉錄組分析表明,有9個基因在三個時間段內持續下調,而6個基因持續上調。 圖3 B. velezensis 504 CFSs處理下RS105轉錄組研究綜述 B. Velezensis 504的CFSs影響(xiang)相關基因表(biao)達 為了探索B. velezensis 504 CFSs對Xoc RS105的可能拮抗機制,觀察了一些與代謝、細胞過程和信號轉導相關的基因的表達,結果發現B. velezensis 504可能通過影響整個代謝途徑、跨膜運輸、細胞運動、DNA翻譯和信號轉導來發揮抗菌活性。 圖4 用B. velezensis 504CFSs處理下的轉錄和qPCR分析結果 CFSs對一些主要毒力相關基因表達的影響(xiang) 為了進一步探討B.velezensis 504的生物防治機制,觀察了DEGs中一些主要毒力相關基因的表達,結果發現B.velezensis 504可能通過下調與T3SS、T2SS、T4P、T6SS、EPS和LPS等毒力因子相關的關鍵毒力基因來發揮生物防治作用。 圖5 RS105毒力基因對B.velezensis 504的轉錄反應 B.velezensis 504是一種(zhong)潛在的水稻生物防治劑 利用秈稻IR24、粳稻品種“日本裸”和湖南省秈稻品種“遠豐早”3個易感品種進行田間試驗,結果表明,B.velezensis 504對IR24具有良好的生物防治作用。與對照相比,504-Pre和504-Tre處理顯著降低了水田BB對IR24的嚴重程度,對“立蓬”的相對防治效率分別為76.75%和76.54%,,對“原豐藻”的相對防治效率分別為78.41%和61.03%,說明504-Pre和504-Tre處理對“立蓬”和“原豐藻”的相對防治效率無顯著差異。綜上所述,B.velezensis 504是一種很有前途的水稻生物防治劑。 圖6 B.velezensis 504生物防治效果以及拮抗實驗結果 B.velezensis 504能有(you)效(xiao)拮抗一些重要的植物(wu)病(bing)原真(zhen)菌,促進植物(wu)生長 研究了B.velezensis 504對葡萄灰霉病菌、稻瘟病菌、禾谷赤霉病菌和禾谷赤霉病菌的抑制作用。結果表明,在對照培養皿中,所有真菌菌株都能在培養皿的整個表面上擴散,而無論是細菌懸浮液還是B.velezensis 504的CFSs,都能明顯抑制其菌絲的生長。促進植物生長的能力實驗結果表明,B.Velezensis 504是一種多功能植物益生菌。
結 論
研究表明,B.velezensis 504具有較強的抗菌、抗真菌活性和促進植物生長的特性,是一種潛在的植物病害生物防治資源。此外,轉錄組分析還揭示了生物防治劑破壞病原菌和干擾細菌生長的機制,為農業生物防治提供了基礎。
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文(wen)章(zhang)索引:Zhou Q, Tu M, Fu X, et al. Antagonistic transcriptome profile reveals potential mechanisms of action on Xanthomonas oryzae pv. oryzicola by the cell-free supernatants of Bacillus velezensis 504, a versatile plant probiotic bacterium[J]. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology, 2023, 13: 1175446.