2025-04-25
文(wen)章題目：KK2DP7 Stimulates CD11b+ Cell Populations in the Spleen to Elicit Trained Immunity for Anti-Tumor Therapy
四川大學華西醫院腫瘤中心和生物治療國家重點實驗室研究團隊在Advanced Science上發(fa)表了題為“KK2DP7 Stimulates CD11b+ Cell Populations in the Spleen to Elicit Trained Immunity for Anti-Tumor Therapy”的多組(zu)學文章，研究發(fa)現樹突狀肽KK2DP7作為模型佐劑給(gei)藥(yao)后可(ke)以刺激脾臟中(zhong)的CD11b+細胞群，激發(fa)針(zhen)對腫(zhong)瘤治療(liao)的訓(xun)練免疫(yi)。
本研究中(zhong)轉(zhuan)錄組RNA-seq、表(biao)觀(guan)ATAC-seq測(ce)序檢測(ce)及部分數(shu)據分析(xi)工作由上海派森(sen)諾生物科技股份有限公司完成(cheng)。
研究背景(jing)
訓練免(mian)(mian)疫(yi)(yi)，為免(mian)(mian)疫(yi)(yi)系統在初次接觸微(wei)生物(wu)成(cheng)分或免(mian)(mian)疫(yi)(yi)刺激后，對后續挑戰產生增強(qiang)(qiang)反(fan)應(ying)的(de)能力。近年來 “訓練免(mian)(mian)疫(yi)(yi)”成(cheng)為免(mian)(mian)疫(yi)(yi)療法研究熱點，它可(ke)增強(qiang)(qiang)免(mian)(mian)疫(yi)(yi)反(fan)應(ying)，在腫(zhong)瘤(liu)治療方面潛力巨大(da)，然而其機制尚不(bu)明(ming)(ming)晰，已知(zhi)的(de)激動劑也(ye)較為有限。開發新型激動劑并(bing)明(ming)(ming)確其作用(yong)機制成(cheng)為當(dang)前研究的(de)關鍵需求。
研究方法
實驗材料(liao)：
細胞：脾(pi)原代細(xi)胞、EG7 細(xi)胞、CT26 細(xi)胞、LL2 細(xi)胞、293T 細(xi)胞和 B16 - F10 細(xi)胞等
動物(wu)：雌性六到八周齡(ling) C57BL/6J 小(xiao)鼠、TLR2 基(ji)因敲除小(xiao)鼠、IRF7 基(ji)因敲除小(xiao)鼠。
實(shi)驗處理：
建立腫瘤模型：通過(guo)給(gei)小鼠靜脈注射不(bu)同劑(ji)量、不(bu)同頻率的KK2DP7，聯(lian)合使用(yong)β-葡聚糖(tang)作為對照，然后(hou)皮下接種(zhong)不(bu)同腫(zhong)瘤細胞，構建(jian)多種(zhong)腫(zhong)瘤模型，監測腫(zhong)瘤體積、體重(zhong)和生(sheng)存率。
細(xi)胞相關處理(li)：對小鼠進(jin)行脾切除(chu)、分(fen)離脾淋巴細胞(bao)(bao)(bao)和非淋巴細胞(bao)(bao)(bao)、分(fen)選 CD11b+細胞(bao)(bao)(bao)等操作；用KK2DP7或LPS刺激不(bu)同細胞(bao)(bao)(bao)，收集培養上清(qing)檢測細胞(bao)(bao)(bao)因子分(fen)泌(mi)；進(jin)行細胞(bao)(bao)(bao)增殖、吞噬和殺傷(shang)實驗。
動物分(fen)組處理：設置(zhi)野生型、TLR2 基因敲(qiao)除(chu)、IRF7基因敲(qiao)除(chu)小(xiao)鼠組，分別給予KK2DP7或PBS處理。
技術路線
研究結果
1、KK2DP7幫助小鼠抵抗多種腫瘤生長
通過給小鼠靜脈注射不同劑量KK2DP7并接種腫瘤，發現其能抑制腫瘤生長、延長生存期，且效果與劑量和給藥次數有關，與公認的訓練免疫激動劑β-葡聚糖相當，表明KK2DP7可能(neng)是新型訓(xun)練免疫激動劑。
圖(tu)1 KK2DP7給藥可增強小(xiao)鼠(shu)對多種(zhong)腫瘤生長的(de)耐(nai)藥性
2、KK2DP7誘導小鼠脾細胞產(chan)生訓練(lian)免(mian)疫反應以(yi)抵抗腫瘤
從接受KK2DP7預處理的小鼠脾臟、骨髓和外周血單核細胞分離單細胞懸液，經LPS刺激后，發現脾細胞分泌訓練免疫相關細胞因子顯著增加。脾切除實驗表明，KK2DP7通(tong)過訓(xun)練脾細胞發揮抗腫瘤作用。
圖(tu)2 KK2DP7誘導(dao)小鼠脾臟細胞(bao)產生訓練(lian)免(mian)疫應答，導(dao)致抗腫瘤耐藥
3、KK2DP7通過誘導小鼠(shu)脾臟非淋(lin)巴(ba)細胞層的CD11b+細胞產生抗(kang)腫瘤免疫(yi)
將脾臟分為淋巴細胞和非淋巴細胞層，經LPS刺激檢測細胞因子，發現KK2DP7訓練的非淋巴細胞層細胞因子分泌顯著上調。對非淋巴細胞分選CD11b?和CD11b+亞群，用于體外實驗。發現訓練和刺激后僅CD11b+亞群細胞因子分泌顯著上調。表明CD11b+細胞是KK2DP7誘導(dao)訓練免(mian)疫的(de)靶細胞，且(qie)該細(xi)胞經訓練后對腫瘤(liu)細(xi)胞刺激能產生特征性(xing)細(xi)胞因子分泌。
圖(tu)3 KK2DP7誘導的(de)(de)免疫訓練的(de)(de)目(mu)標細胞(bao)是脾臟非淋巴細胞(bao)層中的(de)(de)細胞(bao)
圖4 KK2DP7通(tong)過激活脾臟非淋(lin)巴細胞層(ceng)的CD11b+細胞誘導腫(zhong)瘤免疫治療的訓練
4、暴露于(yu)KK2DP7后，CD11b+細(xi)胞在(zai)轉錄組和ATAC-seq水平上有顯(xian)著改變
對KK2DP7訓練前后的CD11b+細胞進行轉錄組和ATAC測序，發現基因表達和染色質可及性有顯著差異。兩組學聯合發現與免疫反應正向調節、細胞因子產生和I型干擾素調控相關的功能顯著富集，表明KK2DP7訓練正調控免(mian)疫系統。
圖5 KK2DP7治療小鼠脾臟非淋巴細胞(bao)層的CD11b+細胞(bao)組學結(jie)果存在顯(xian)著差異
5、KK2DP7訓練后，脾臟非淋巴細胞層中CD11b+細胞的增殖(zhi)、吞噬(shi)和毒性被(bei)激活(huo)
分析(xi)差異表達基(ji)因功能，發現(xian)細胞(bao)增殖、吞噬和(he)細胞(bao)毒性(xing)相關功能顯著富集。實驗證實，KK2DP7訓練后，CD11b+細胞(bao)在這些方面的能力(li)明顯增強。
圖(tu)6 KK2DP7訓練后(hou)脾臟非(fei)淋巴細(xi)胞(bao)層中CD11b+細(xi)胞(bao)的增殖、吞噬和細(xi)胞(bao)毒(du)性顯著(zhu)增強
6、KK2DP7訓(xun)練(lian)后CD11b+細胞(bao)的抗腫瘤免疫重編程受TLR2-IRF7通路的調控
通過多種分析確定TLR2-IRF7通路在(zai)KK2DP7誘導的(de)訓練免疫中起關鍵作用(yong)。實驗表(biao)明，敲(qiao)除(chu)TLR2或IRF7基因會削(xue)弱KK2DP7的(de)抗腫瘤(liu)效果(guo)，且KK2DP7與免疫檢(jian)查點(dian)抑制劑抗體(ti)聯合(he)使用具有更好的(de)抗腫瘤(liu)效果(guo)，同(tong)時研究還評估了安全(quan)性(xing)。為未來的(de)臨床試驗提供了寶(bao)貴的(de)參考。
圖(tu)7 免疫訓練誘導(dao)的KK2DP7轉(zhuan)錄組(zu)變化和(he)表(biao)觀(guan)遺(yi)傳重編程(cheng)
圖8 KK2DP7誘導的訓(xun)練(lian)免疫依賴于(yu)TLR2-IRF7信(xin)號的參與(yu)
研究結論(lun)
1、KK2DP7可誘(you)導(dao)訓練免疫抑(yi)制腫瘤(liu)生長
2、脾臟CD11b+細胞是關鍵靶細胞
3、KK2DP7訓練(lian)可使CD11b+細(xi)胞(bao)的免疫反(fan)應和細(xi)胞(bao)因子分泌通路激(ji)活(huo)，增強細(xi)胞(bao)增殖、吞噬和殺傷腫瘤細(xi)胞(bao)的能(neng)力，且這些變(bian)化(hua)受(shou)TLR2-IRF7信號軸調控
4、KK2DP7與免疫檢查點(dian)抑制(zhi)劑抗體聯合使用，抗腫瘤效果(guo)更(geng)優
原文索引
//doi.org/10.1002/advs.202500032
