2017-11-03
最近，派森諾生(sheng)物(wu)與廣東省微生(sheng)物(wu)研究(jiu)所合(he)作(zuo)，繼在(zai)《Frontiers in Immunology》發(fa)(fa)表相關研究(jiu)成果之后，又在(zai)《Oncotarget》（影響因子:5.168）發(fa)(fa)表文章，報道了(le)來自猴(hou)頭(tou)菇的(de)多糖提(ti)取物(wu)及酒(jiu)精性提(ti)取物(wu)通過對(dui)炎性腸(chang)(chang)病大鼠的(de)腸(chang)(chang)道微生(sheng)物(wu)調(diao)節，從而發(fa)(fa)揮免(mian)疫調(diao)節作(zuo)用，同時(shi)驗證(zheng)了(le)猴(hou)頭(tou)菇多糖提(ti)取物(wu)可起(qi)到益生(sheng)元的(de)作(zuo)用，為臨床(chuang)炎性腸(chang)(chang)病的(de)預(yu)防及治療提(ti)供了(le)寶貴參考意義(yi)。
1 研究背景
炎性腸病（Inflammatory bowel disease，IBD）是一種慢性腸道(dao)炎癥性疾病，其癥狀表現為腹痛、腹瀉、便血和體重減輕等。據報道(dao)，目前IBD在全世界范圍內發(fa)病率(lv)均有增加(jia)。
目前IBD的(de)發(fa)病機制尚(shang)不清楚，猜測與遺傳(chuan)、免疫功(gong)能障礙(ai)、環境及心理(li)因(yin)素有關(guan)。對(dui)于IBD的(de)治療(liao)，尚(shang)無特異性強而毒副作用小的(de)藥物(wu)。針對(dui)IBD開發(fa)具有確切治療(liao)效果且毒副作用低的(de)新(xin)型藥物(wu)，具有重要的(de)科(ke)學(xue)意義(yi)和臨床價值。
猴頭菇是藥食兩用真菌，它具有豐(feng)富(fu)的二萜(tie)類化合物、類固醇與多糖等(deng)功能活性(xing)成(cheng)分；另外有報道稱(cheng)，其提取物成(cheng)分具有提高機體免疫(yi)力，抗(kang)致病菌等(deng)功效，這些都為臨床治(zhi)療IBD提供(gong)了更多的可能性(xing)。
2 研究方法
測序技術：Illumina MiSeq高通量測序平臺
測序模式(shi)：微生物組16S rRNA基因V3-V4區(qu)測序
實驗(yan)設計：
1、TNBS誘導的IBD大鼠中猴(hou)頭菇提取物效應的實驗設計
實驗對象 | 處理方式 | 組名 | 樣品數 |
成(cheng)年(nian)雄性SD大(da)鼠(shu) | 無任何處理(li) | Normal | 5 |
TNBS處理 | Model | 5 | |
TNBS處理+ 5-氨(an)基水楊酸 | 5-ASA | 5 | |
TNBS處理+猴頭菇全提取(qu)物 | WE | 5 | |
TNBS處理+猴頭菇(gu)酒精(jing)性提取物 | AE | 5 | |
TNBS處(chu)理+猴頭(tou)菇多糖(tang)提取物 | PE | 5 |
2、TNBS誘導的IBD小鼠中猴頭(tou)菇多糖提取(qu)物益生元效應實驗設計
實驗(yan)對象 | 處理方式(shi) | 組名(ming) | 樣品數 |
雄(xiong)性昆明小鼠 | 無任(ren)何(he)處理 | Normal | 9 |
TNBS處理(li) | Model | 9 | |
TNBS處(chu)理+抗生素 | Antibiotics+Model | 9 | |
TNBS處理+猴頭菇多糖提取物 | PE | 9 | |
TNBS處理(li)+雙(shuang)歧桿(gan)菌 | Bifido | 9 | |
TNBS處(chu)理+猴(hou)頭菇多糖(tang)提取物+抗(kang)生素(su) | PE+Antibiotics | 9 | |
TNBS處理+猴頭菇(gu)多糖提取物+雙歧桿菌 | PE+Bifido | 9 | |
TNBS處理+抗(kang)生素+雙歧桿菌 | Antibiotics+Bifido | 9 | |
TNBS處理+猴頭菇多糖(tang)提取物+抗生素+雙歧桿菌 | PE+Antibiotics+Bifido | 9 |
3、猴頭菇提取物用于IBD預防與治療的活性成分及作用方(fang)式
3 研究結果
3.1 猴頭菇提取物對(dui)IBD大(da)鼠臨床及組織(zhi)學特征(zheng)的改(gai)善
治療14天(tian)后的免疫組化及組織HE染(ran)色結果顯示，猴頭菇提取物處理組對于大(da)鼠(shu)結腸(chang)損傷有(you)改善。
3.2 猴頭菇提取物有效(xiao)改善免疫調(diao)控
通過(guo)對治(zhi)療14天(tian)后的(de)血清細(xi)胞因(yin)子(zi)進行檢(jian)測，發現(xian)猴頭(tou)菇提取(qu)物可有(you)效調節促炎(yan)細(xi)胞因(yin)子(zi)與抗炎(yan)細(xi)胞因(yin)子(zi)，使其下調或(huo)者上調；另外加入猴頭(tou)菇提取(qu)物的(de)處理組可有(you)效抑(yi)制髓過(guo)氧化物酶的(de)表(biao)達，起到降低IBD大鼠炎(yan)性腸病癥(zheng)狀的(de)作用(yong)，同(tong)時表(biao)明(ming)猴頭(tou)菇提取(qu)物可作為潛(qian)在(zai)治(zhi)療IBD癥(zheng)狀的(de)藥物的(de)價值。
3.3 猴(hou)頭菇(gu)提取物可有效改善(shan)腸(chang)道菌群結(jie)構
對(dui)大(da)鼠糞便(bian)樣品(pin)進行高(gao)通量測序，結果顯示猴(hou)頭菇(gu)酒(jiu)精性(xing)提(ti)取(qu)(qu)物處理組與正常組的腸(chang)(chang)道菌(jun)(jun)群更加相(xiang)似(si)，多(duo)糖提(ti)取(qu)(qu)物處理組與模型組的腸(chang)(chang)道菌(jun)(jun)群相(xiang)似(si)，而猴(hou)頭菇(gu)全提(ti)取(qu)(qu)物處理組與正常組和模型組腸(chang)(chang)道菌(jun)(jun)群都(dou)不一樣；這表(biao)明猴(hou)頭菇(gu)酒(jiu)精性(xing)提(ti)取(qu)(qu)物可做為猴(hou)頭菇(gu)的主要活(huo)性(xing)物質，將IBD大(da)鼠的腸(chang)(chang)道菌(jun)(jun)群調(diao)節為正常結構。
基于糞(fen)便樣品屬水平菌群Metastats分析結(jie)果顯示(shi)，猴(hou)頭菇提取物(wu)處理組(zu)與(yu)模型組(zu)之間存在(zai)差異(yi)，并可有效調節潛(qian)在(zai)的促(cu)炎微生物(wu)，如Corynebacterium、Staphylococcus、Ruminococcus、Roseburia、Dorea、Sutterella含量降低，以及潛(qian)在(zai)的抗炎微生物(wu)，如Bacteroides、Bifidobacterium、Prevotella、Parabacteroides、Coprococcus、Desulfovibrio、Lactobacillus富集，使其豐度更加(jia)接近正常(chang)組(zu)，尤其是酒精性提取物(wu)處理組(zu)，效果更加(jia)明顯。
3.4 猴(hou)頭菇多糖(tang)提(ti)取物對IBD小鼠益生元效應(ying)研(yan)究(jiu)
對小鼠隨機進行(xing)多組(zu)(zu)處理(li)后，通過(guo)檢測(ce)血清細胞因(yin)子等(deng)臨床指標，發(fa)現猴頭菇(gu)多糖提取物處理(li)組(zu)(zu)，特別是組(zu)(zu)合雙歧桿菌治療組(zu)(zu)的細胞因(yin)子水(shui)平(ping)恢復的好(hao)(hao)，甚至一些臨床參(can)數要(yao)好(hao)(hao)于對照組(zu)(zu)；
免(mian)疫(yi)組(zu)(zu)化染色結果(guo)顯(xian)示，猴頭菇多(duo)糖(tang)(tang)提(ti)取(qu)物組(zu)(zu)合雙歧桿菌(jun)治療(liao)組(zu)(zu)治療(liao)效果(guo)明顯(xian)好于模型組(zu)(zu)組(zu)(zu)合抗生素處理組(zu)(zu)，其中NF-κB、TNF-α與IL-17在多(duo)糖(tang)(tang)組(zu)(zu)合雙歧桿菌(jun)治療(liao)組(zu)(zu)中表達(da)降低，而Foxp3表達(da)量增加(jia)；
對小鼠盲(mang)腸內(nei)容物樣品進行(xing)高通量(liang)測序，不(bu)同處理組菌群結(jie)果(guo)顯(xian)示，猴頭菇多(duo)糖(tang)提(ti)取物可增(zeng)加盲(mang)腸內(nei)容物中雙歧桿菌的含(han)量(liang)，降低主(zhu)要由(you)Bacteroides spp.、B. vulgatus、Desulfovibrio spp.等引起的在(zai)血清及炎癥中的LPS水(shui)平；以上結(jie)果(guo)均表明多(duo)糖(tang)提(ti)取物可用(yong)作益生元。
4 總結
本研究(jiu)亮點：
1、項(xiang)目前期(qi)通(tong)過免疫組化(hua)等試驗驗證(zheng)猴(hou)頭菇(gu)提(ti)取物對于炎性腸病的(de)抗炎效果(guo)；
2、結合高(gao)通量測序(xu)結果，進一步說明猴(hou)頭菇(gu)提取(qu)物(wu)的(de)抗炎(yan)作(zuo)用是通過改變(bian)小鼠(shu)腸道菌群，進而(er)產生的(de)免(mian)疫(yi)調節(jie)機制，并且發現酒精性提取(qu)物(wu)的(de)作(zuo)用效(xiao)果；
3、深入研究發現，猴頭菇多(duo)糖提取物可起到益(yi)生(sheng)元的作用(yong)。
綜合以上結果，更加驗證(zheng)猴頭菇提取物可通過調節腸(chang)道菌群及免(mian)疫系統緩(huan)解炎性腸(chang)病的臨床潛力。
本研究的高(gao)通(tong)量測序和部分生物信息分析工作(zuo)由(you)上海派森諾生物科技股份有限公司(si)合(he)作(zuo)完成(cheng)。
參考文獻
Chen D, Yang X, Zheng C, et al. Extracts from Hericium erinaceus relieve inflammatory bowel disease by regulating immunity and gut microbiota[J]. Oncotarget, 2017.
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