這(zhe)(zhe)個(ge)(ge)(ge)按照老師的實驗設(she)計來。如果空轉的樣本來自四個(ge)(ge)(ge)病(bing)(bing)人，那(nei)么建(jian)議每個(ge)(ge)(ge)病(bing)(bing)人做一個(ge)(ge)(ge)單細胞。如果有幾個(ge)(ge)(ge)空轉的樣本來自一個(ge)(ge)(ge)病(bing)(bing)人的同一個(ge)(ge)(ge)組織(zhi)，可以這(zhe)(zhe)幾個(ge)(ge)(ge)樣本配一個(ge)(ge)(ge)單細胞。

對(dui)于預透(tou)化(hua)，我們已針對(dui)很多個樣本(ben)進行了測試(shi)。樣本(ben)的(de)(de)透(tou)化(hua)時間(jian)，其(qi)實是一(yi)個比較長的(de)(de)時間(jian)范(fan)圍(wei)(wei)，在那個范(fan)圍(wei)(wei)內都(dou)可(ke)以達到很好的(de)(de)mRNA釋放的(de)(de)效果。所(suo)以一(yi)般的(de)(de)組織(zhi)經過預實驗摸索基本(ben)都(dou)可(ke)以找到透(tou)化(hua)時間(jian)。

空間轉錄組Visium芯(xin)片(pian)的(de)捕(bu)(bu)獲(huo)(huo)面積(ji)為6.5mmX6.5mm，所(suo)以在選擇(ze)樣本(ben)前，首先確認好(hao)取材位置及合理的(de)組(zu)織大(da)小，可(ke)以保證Visium芯(xin)片(pian)的(de)有效利用率。因此對于(yu)樣本(ben)大(da)小，和捕(bu)(bu)獲(huo)(huo)區域比較合適(shi)，大(da)于(yu)捕(bu)(bu)獲(huo)(huo)區域面積(ji)的(de)樣本(ben)，可(ke)以考(kao)慮(lv)放(fang)在兩個(ge)捕(bu)(bu)獲(huo)(huo)區域。小于(yu)捕(bu)(bu)獲(huo)(huo)區域面積(ji)的(de)樣本(ben)，很(hen)難做到一個(ge)區域放(fang)多個(ge)樣本(ben)，只能試做。

獲取新鮮組(zu)織后，要對(dui)組(zu)織進行一定的(de)處理：

1、先冷(leng)凍后(hou)包埋(mai)法(fa)：新鮮組(zu)織(zhi)(zhi)樣本取(qu)下后(hou)要(yao)迅(xun)速(su)(su)用(yong)預冷(leng)的PBS溶(rong)液(ye)或生(sheng)理鹽水(shui)進行(xing)沖洗，去除組(zu)織(zhi)(zhi)表面殘留，然后(hou)用(yong)干(gan)(gan)凈的吸水(shui)紙吸干(gan)(gan)液(ye)體(ti)，用(yong)預冷(leng)的鑷子(zi)將(jiang)新鮮組(zu)織(zhi)(zhi)浸沒在(zai)(zai)異戊烷，組(zu)織(zhi)(zhi)速(su)(su)凍 1min 或直至組(zu)織(zhi)(zhi)完全冷(leng)凍(實際冷(leng)凍時間取(qu)決于組(zu)織(zhi)(zhi)形態及(ji)大小)，一旦冷(leng)凍，將(jiang)組(zu)織(zhi)(zhi)轉(zhuan)移到一個預冷(leng)的 WHEATON CryoELITE 低溫冷(leng)凍瓶(ping)中，并(bing)放置(zhi)在(zai)(zai)干(gan)(gan)冰上。接下來冷(leng)凍組(zu)織(zhi)(zhi)可放置(zhi)在(zai)(zai)-80℃下長(chang)期(qi)保存或立即進行(xing)下一步冷(leng)凍組(zu)織(zhi)(zhi)OCT包埋(mai)。

2、包埋(mai)和冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)同時(shi)進(jin)行(xing)法：某些(xie)非常柔軟的(de)(de)組織(zhi)（比如胚(pei)胎等），失去液體的(de)(de)支撐就會改變其正(zheng)常形態，對于這樣的(de)(de)組織(zhi)可(ke)采(cai)取冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)和包埋(mai)同時(shi)進(jin)行(xing)的(de)(de)方法。沒有異戊(wu)烷(wan)的(de)(de)條件下，可(ke)以采(cai)取包埋(mai)和冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)同時(shi)進(jin)行(xing)的(de)(de)方法。