用(yong)(yong)(yong)紫外(wai)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)在260nm波長測(ce)(ce)定(ding)溶(rong)(rong)液(ye)(ye)的(de)(de)(de)(de)(de)吸(xi)光(guang)度(du)來定(ding)量，請(qing)注(zhu)意紫外(wai)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)使用(yong)(yong)(yong)，測(ce)(ce)定(ding)時溶(rong)(rong)液(ye)(ye)的(de)(de)(de)(de)(de)吸(xi)光(guang)度(du)稀(xi)釋到0.2-0.8之間(吸(xi)光(guang)度(du)太(tai)高(gao)或太(tai)低(di)會有較大的(de)(de)(de)(de)(de)誤差(cha))。DNA干(gan)粉(fen)用(yong)(yong)(yong)一(yi)定(ding)體積的(de)(de)(de)(de)(de)水(shui)(shui)充分(fen)振蕩(dang)溶(rong)(rong)解以后，取(qu)部分(fen)溶(rong)(rong)液(ye)(ye)稀(xi)釋到1ml并在1ml標準比(bi)(bi)色(se)皿中(zhong)測(ce)(ce)定(ding)其吸(xi)光(guang)度(du)，即為所測(ce)(ce)體積的(de)(de)(de)(de)(de)OD值，進而可(ke)以計(ji)算出(chu)母(mu)(mu)液(ye)(ye)的(de)(de)(de)(de)(de)OD值。 舉例：您拿到一(yi)管(guan)干(gan)粉(fen)的(de)(de)(de)(de)(de)DNA，用(yong)(yong)(yong)1ml水(shui)(shui)溶(rong)(rong)解成母(mu)(mu)液(ye)(ye)，取(qu)該母(mu)(mu)液(ye)(ye)50μL稀(xi)釋成1ml并在1ml標準比(bi)(bi)色(se)杯中(zhong)測(ce)(ce)定(ding)的(de)(de)(de)(de)(de)吸(xi)光(guang)度(du)為0.25，說(shuo)明(ming)該50μL中(zhong)含(han)有0.25OD的(de)(de)(de)(de)(de)DNA，也即說(shuo)明(ming)原來1ml母(mu)(mu)液(ye)(ye)中(zhong)含(han)有5OD的(de)(de)(de)(de)(de)DNA。                                    

初始(shi)拿(na)到(dao)的(de)(de)(de)DNA，其性(xing)狀為薄膜(mo)狀或(huo)者粉末狀的(de)(de)(de)白色粉末，附在(zai)離(li)心管(guan)(guan)(guan)(guan)內壁(bi)上。稀(xi)釋前，請將(jiang)引物(wu)管(guan)(guan)(guan)(guan)離(li)心數秒使(shi)DNA聚集到(dao)管(guan)(guan)(guan)(guan)低，小(xiao)心開啟管(guan)(guan)(guan)(guan)蓋，以免引起粉末飛揚造(zao)成(cheng)DNA損失(shi)，再加(jia)(jia)入適量的(de)(de)(de)TE緩沖(chong)液(ye)，蓋好(hao)管(guan)(guan)(guan)(guan)蓋，漩(xuan)渦振蕩混勻并(bing)使(shi)其充分溶(rong)(rong)解(jie)。建議將(jiang)引物(wu)稀(xi)釋于TE（10mM Tris-HCL，pH8.0，1mM EDTA）溶(rong)(rong)液(ye)中，濃度高于10μM，并(bing)于-200C儲(chu)存(cun)。 例如：如果您需(xu)要(yao)稀(xi)釋到(dao)10μM，只(zhi)需(xu)要(yao)加(jia)(jia)入（管(guan)(guan)(guan)(guan)內總(zong)nmol數/10）ml的(de)(de)(de)TE即(ji)可(ke)。沒有溶(rong)(rong)解(jie)的(de)(de)(de)引物(wu)非常穩定，可(ke)以在(zai)-20℃下保存(cun)至(zhi)少(shao)1年(nian)，溶(rong)(rong)解(jie)好(hao)的(de)(de)(de)引物(wu)可(ke)以事先稀(xi)釋為100μmoL/L的(de)(de)(de)儲(chu)存(cun)液(ye)，分裝數份保存(cun)于-20℃冰箱，可(ke)以保存(cun)至(zhi)少(shao)半年(nian)以上（反復多次凍融會降低使(shi)用壽命）。                                    

熒(ying)光(guang)標記（如HEX,TET,FAM,Cy3，Cy5等）的DNA對(dui)光(guang)較敏感，在(zai)合成及運輸過程中(zhong)。接到合成引(yin)物(wu)后，請立即(ji)避(bi)光(guang)保存。對(dui)于(yu)非(fei)Cy類的熒(ying)光(guang)標記引(yin)物(wu)，建議將引(yin)物(wu)稀(xi)釋于(yu)TE溶(rong)液中(zhong)，濃度高于(yu)10μM，并于(yu)-20℃儲存于(yu)暗盒中(zhong)。Cy3及Cy5標記的引(yin)物(wu)在(zai)堿性條件(jian)下易降解，所以(yi)此類引(yin)物(wu)應于(yu)中(zhong)性條件(jian)下在(zai)-20℃避(bi)光(guang)保存。                                    

如果您溶(rong)解(jie)引(yin)(yin)(yin)物的(de)水PH過低(di)或污(wu)染了菌或核酸酶(mei)，會使(shi)(shi)引(yin)(yin)(yin)物降解(jie)。使(shi)(shi)用(yong)時沒(mei)有(you)充分(fen)(fen)解(jie)凍(dong)混(hun)合(he)，液體不(bu)(bu)均勻也可能會造(zao)成引(yin)(yin)(yin)物加入(ru)量不(bu)(bu)準確。建議分(fen)(fen)裝(zhuang)引(yin)(yin)(yin)物，避(bi)免反復凍(dong)溶(rong)。建議使(shi)(shi)用(yong)10mM Tris pH7.5緩沖液溶(rong)解(jie)引(yin)(yin)(yin)物，因為有(you)些蒸餾水的(de)pH值比較低(di)（pH4-5）,引(yin)(yin)(yin)物在這種條(tiao)件下不(bu)(bu)穩定。還有(you)一種可能性是(shi)引(yin)(yin)(yin)物沒(mei)有(you)問題，而是(shi)PCR使(shi)(shi)用(yong)材料是(shi)模板的(de)質量與先前使(shi)(shi)用(yong)的(de)不(bu)(bu)完(wan)全(quan)一致(zhi)。                                    

◆ C18柱(zhu)脫鹽(yan)：有(you)人稱(cheng)其為簡易反相(xiang)柱(zhu)，它(ta)對DNA有(you)特(te)異性的(de)(de)吸(xi)附，可以(yi)被有(you)機溶(rong)解洗(xi)脫，但(dan)不會被水洗(xi)脫，所以(yi)能(neng)去除鹽(yan)分。它(ta)不能(neng)去除比目的(de)(de)片(pian)(pian)段短的(de)(de)小(xiao)片(pian)(pian)段。實際上，它(ta)是(shi)(shi)(shi)一種脫鹽(yan)的(de)(de)作用(yong)(yong)(yong)。這種方法(fa)一般不會對普通PCR反應(ying)產生影(ying)響。對于(yu)需(xu)要(yao)用(yong)(yong)(yong)于(yu)測序、克隆(long)的(de)(de)引(yin)物不能(neng)使用(yong)(yong)(yong)這個級別。 ◆ PAGE純(chun)：PAGE純(chun)化(hua)(hua)(hua)法(fa)是(shi)(shi)(shi)使用(yong)(yong)(yong)變性聚(ju)丙烯酰(xian)胺凝(ning)膠電泳，對DNA片(pian)(pian)段進(jin)行分離，然后(hou)從凝(ning)膠中回(hui)收目的(de)(de)DNA的(de)(de)方法(fa)。PAGE純(chun)化(hua)(hua)(hua)法(fa)也是(shi)(shi)(shi)一種非常(chang)有(you)效(xiao)的(de)(de)DNA純(chun)化(hua)(hua)(hua)方法(fa)，純(chun)化(hua)(hua)(hua)后(hou)的(de)(de)DNA純(chun)度大(da)(da)于(yu)95%，對長鏈Oligo DNA (大(da)(da)于(yu)50mer)的(de)(de)純(chun)化(hua)(hua)(hua)。 ◆ HPLC純(chun)化(hua)(hua)(hua)：HPLC純(chun)化(hua)(hua)(hua)是(shi)(shi)(shi)使用(yong)(yong)(yong)高(gao)效(xiao)液相(xiang)色譜的(de)(de)原理，對DNA片(pian)(pian)段進(jin)行純(chun)化(hua)(hua)(hua)。純(chun)度可以(yi)大(da)(da)于(yu)99%。主(zhu)要(yao)用(yong)(yong)(yong)于(yu)短鏈和修飾引(yin)物的(de)(de)純(chun)化(hua)(hua)(hua)。該法(fa)的(de)(de)弱點(dian)是(shi)(shi)(shi)成本較高(gao)，批(pi)量生產效(xiao)率(lv)不高(gao)。                                    

連接反應(ying)需(xu)要(yao)(yao)(yao)(yao)引物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)5’磷酸基團(tuan)。如果需(xu)要(yao)(yao)(yao)(yao)將合成的(de)(de)引物(wu)(wu)(wu)退火直(zhi)接連接相應(ying)的(de)(de)載(zai)體(ti)上(shang)(shang)，引物(wu)(wu)(wu)需(xu)要(yao)(yao)(yao)(yao)磷酸化(hua)(hua)。磷酸化(hua)(hua)的(de)(de)產(chan)物(wu)(wu)(wu)如果還不(bu)能(neng)連接載(zai)體(ti)上(shang)(shang)，需(xu)要(yao)(yao)(yao)(yao)檢(jian)查載(zai)體(ti)的(de)(de)酶切效果，SiRNA分子(zi)具有特殊的(de)(de)對稱結構(gou)，退火的(de)(de)難度(du)較大，退火時(shi)需(xu)要(yao)(yao)(yao)(yao)提高退火溫度(du)。