10x genomics單(dan)(dan)細(xi)胞(bao)免(mian)疫組庫(ku)(ku)測(ce)(ce)序(xu)技術(shu)是利用微流體交叉系統(tong)將含Barcoded RT Primers的(de)(de)(de)Gel Beads、細(xi)胞(bao)和(he)酶的(de)(de)(de)混合物(wu)、油三(san)者結合形成GEMs，在GEMs中，凝(ning)膠珠自動(dong)溶(rong)解釋(shi)放大量barcode序(xu)列，同(tong)時每個細(xi)胞(bao)裂解釋(shi)放出mRNA，mRNA再逆轉錄(lu)產生帶有10x barcode和(he)UMI信息(xi)的(de)(de)(de)cDNA。標記(ji)后(hou)的(de)(de)(de)cDNA被分成2份，一(yi)份使用針(zhen)對(dui)TCR/BCR的(de)(de)(de)C區巢式引(yin)物(wu)擴增(zeng)，從而(er)富集T細(xi)胞(bao)或B細(xi)胞(bao)，獲(huo)得TCR/BCR全(quan)長VDJ序(xu)列，另一(yi)份直接構建基(ji)因(yin)表達(da)的(de)(de)(de)文(wen)庫(ku)(ku)，獲(huo)取5’端基(ji)因(yin)表達(da)的(de)(de)(de)數據(ju)。最后(hou)使用Illumina測(ce)(ce)序(xu)平臺對(dui)文(wen)庫(ku)(ku)進(jin)(jin)行(xing)測(ce)(ce)序(xu)檢測(ce)(ce)，即可一(yi)次性(xing)獲(huo)得大量單(dan)(dan)細(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)基(ji)因(yin)表達(da)和(he)免(mian)疫組庫(ku)(ku)數據(ju)，從而(er)實現在單(dan)(dan)細(xi)胞(bao)水(shui)平進(jin)(jin)行(xing)免(mian)疫組庫(ku)(ku)測(ce)(ce)序(xu)的(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)。該(gai)技術(shu)將免(mian)疫組庫(ku)(ku)測(ce)(ce)序(xu)和(he)轉錄(lu)組測(ce)(ce)序(xu)結合起(qi)來，可觀察在不同(tong)的(de)(de)(de)細(xi)胞(bao)亞群里面免(mian)疫組庫(ku)(ku)多樣性(xing)的(de)(de)(de)情(qing)況(kuang)。
10x genomics單細(xi)(xi)胞免(mian)疫組(zu)庫(ku)測(ce)(ce)序(xu)(xu)技術是利用微(wei)流體交叉系統將含Barcoded RT Primers的(de)(de)Gel Beads、細(xi)(xi)胞和酶的(de)(de)混合(he)物、油(you)三者結合(he)形成GEMs，在(zai)GEMs中，凝(ning)膠珠自動溶解釋放大量barcode序(xu)(xu)列，同(tong)時(shi)每(mei)個(ge)細(xi)(xi)胞裂解釋放出mRNA，mRNA再逆轉錄(lu)產生帶(dai)有10x barcode和UMI信息的(de)(de)cDNA。標記(ji)后的(de)(de)cDNA被分成2份(fen)，一(yi)份(fen)使(shi)用針對TCR/BCR的(de)(de)C區巢(chao)式引物擴增(zeng)，從(cong)(cong)而富集T細(xi)(xi)胞或(huo)B細(xi)(xi)胞，獲(huo)得TCR/BCR全長VDJ序(xu)(xu)列，另一(yi)份(fen)直接(jie)構建基因(yin)表(biao)達(da)的(de)(de)文庫(ku)，獲(huo)取5’端基因(yin)表(biao)達(da)的(de)(de)數據。最(zui)后使(shi)用Illumina測(ce)(ce)序(xu)(xu)平臺(tai)對文庫(ku)進行測(ce)(ce)序(xu)(xu)檢測(ce)(ce)，即(ji)可(ke)一(yi)次性獲(huo)得大量單細(xi)(xi)胞的(de)(de)基因(yin)表(biao)達(da)和免(mian)疫組(zu)庫(ku)數據，從(cong)(cong)而實現(xian)在(zai)單細(xi)(xi)胞水平進行免(mian)疫組(zu)庫(ku)測(ce)(ce)序(xu)(xu)的(de)(de)目的(de)(de)。該技術將免(mian)疫組(zu)庫(ku)測(ce)(ce)序(xu)(xu)和轉錄(lu)組(zu)測(ce)(ce)序(xu)(xu)結合(he)起來(lai)，可(ke)觀察在(zai)不同(tong)的(de)(de)細(xi)(xi)胞亞群里面免(mian)疫組(zu)庫(ku)多樣(yang)性的(de)(de)情況。
