10x genomics單細胞(bao)(bao)(bao)(bao)免疫(yi)組(zu)庫測(ce)(ce)序(xu)(xu)(xu)技(ji)術是利用微流(liu)體交叉系統將含Barcoded RT Primers的(de)(de)Gel Beads、細胞(bao)(bao)(bao)(bao)和酶的(de)(de)混合物、油(you)三(san)者結合形成GEMs，在(zai)GEMs中，凝(ning)膠(jiao)珠自動溶解釋放大量barcode序(xu)(xu)(xu)列，同(tong)時每個細胞(bao)(bao)(bao)(bao)裂解釋放出(chu)mRNA，mRNA再逆轉錄產生帶有10x barcode和UMI信息的(de)(de)cDNA。標記后(hou)的(de)(de)cDNA被分成2份，一份使用針對(dui)TCR/BCR的(de)(de)C區(qu)巢(chao)式(shi)引物擴增，從(cong)而(er)富(fu)集(ji)T細胞(bao)(bao)(bao)(bao)或B細胞(bao)(bao)(bao)(bao)，獲得(de)TCR/BCR全長VDJ序(xu)(xu)(xu)列，另一份直接構建基(ji)因(yin)表達的(de)(de)文(wen)庫，獲取5’端基(ji)因(yin)表達的(de)(de)數(shu)據(ju)。最后(hou)使用Illumina測(ce)(ce)序(xu)(xu)(xu)平臺(tai)對(dui)文(wen)庫進行測(ce)(ce)序(xu)(xu)(xu)檢測(ce)(ce)，即可一次(ci)性(xing)獲得(de)大量單細胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)基(ji)因(yin)表達和免疫(yi)組(zu)庫數(shu)據(ju)，從(cong)而(er)實現在(zai)單細胞(bao)(bao)(bao)(bao)水(shui)平進行免疫(yi)組(zu)庫測(ce)(ce)序(xu)(xu)(xu)的(de)(de)目的(de)(de)。該技(ji)術將免疫(yi)組(zu)庫測(ce)(ce)序(xu)(xu)(xu)和轉錄組(zu)測(ce)(ce)序(xu)(xu)(xu)結合起(qi)來(lai)，可觀察在(zai)不同(tong)的(de)(de)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)亞(ya)群里面免疫(yi)組(zu)庫多樣性(xing)的(de)(de)情況。
10x genomics單(dan)(dan)細胞免(mian)疫(yi)(yi)(yi)組(zu)(zu)庫(ku)測(ce)(ce)序(xu)(xu)技術(shu)是利用微流(liu)體交叉系統(tong)將含(han)Barcoded RT Primers的Gel Beads、細胞和酶的混合(he)(he)物(wu)、油三者結合(he)(he)形成GEMs，在(zai)GEMs中，凝膠珠自動溶解釋(shi)放(fang)大(da)量barcode序(xu)(xu)列(lie)，同(tong)時每個細胞裂(lie)解釋(shi)放(fang)出(chu)mRNA，mRNA再逆轉(zhuan)錄(lu)產生帶有10x barcode和UMI信(xin)息的cDNA。標記后的cDNA被(bei)分成2份(fen)，一份(fen)使用針(zhen)對TCR/BCR的C區巢式引物(wu)擴增，從而富集T細胞或B細胞，獲(huo)得(de)TCR/BCR全長VDJ序(xu)(xu)列(lie)，另(ling)一份(fen)直接(jie)構建(jian)基因表(biao)達(da)的文(wen)庫(ku)，獲(huo)取5’端基因表(biao)達(da)的數(shu)據。最后使用Illumina測(ce)(ce)序(xu)(xu)平臺對文(wen)庫(ku)進行測(ce)(ce)序(xu)(xu)檢測(ce)(ce)，即可一次(ci)性(xing)獲(huo)得(de)大(da)量單(dan)(dan)細胞的基因表(biao)達(da)和免(mian)疫(yi)(yi)(yi)組(zu)(zu)庫(ku)數(shu)據，從而實現在(zai)單(dan)(dan)細胞水平進行免(mian)疫(yi)(yi)(yi)組(zu)(zu)庫(ku)測(ce)(ce)序(xu)(xu)的目的。該技術(shu)將免(mian)疫(yi)(yi)(yi)組(zu)(zu)庫(ku)測(ce)(ce)序(xu)(xu)和轉(zhuan)錄(lu)組(zu)(zu)測(ce)(ce)序(xu)(xu)結合(he)(he)起來(lai)，可觀察在(zai)不同(tong)的細胞亞群里(li)面免(mian)疫(yi)(yi)(yi)組(zu)(zu)庫(ku)多樣性(xing)的情況。
