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科研服務

ChIP-Seq

常見問題

  • Input是什(shen)么,有什(shen)么作用

    input是指樣(yang)本(ben)經過超聲(sheng),但是沒有進(jin)行(xing)(xing)ChIP,包含(han)樣(yang)本(ben)超聲(sheng)后總DNA,可以進(jin)行(xing)(xing)電泳,檢測超聲(sheng)效(xiao)果,同(tong)時,可以與最后ChIP樣(yang)本(ben)進(jin)行(xing)(xing)比較,看ChIP的(de)(de)(de)效(xiao)率(如果用(yong)同(tong)一(yi)引物進(jin)行(xing)(xing)PCR,ChIP組和input組亮度差不多,說(shuo)明(ming)ChIP效(xiao)率高(gao),基本(ben)上,樣(yang)本(ben)中所有的(de)(de)(de)目(mu)的(de)(de)(de)基因片段(duan)都被ChIP下來了,反之(zhi),說(shuo)明(ming)效(xiao)率低,實驗(yan)條件有待改進(jin))

  • ChIP-seq測序(xu)需要(yao)多少數據量(liang)?

    推薦20M reads /樣本的數據量。

  • 文庫制備過程是否需要PCR 擴(kuo)增?PCR 擴(kuo)增后(hou)是否會影響最(zui)后(hou)的結(jie)果(guo)?                                    

    基于二代測(ce)序平臺的ChIP-Seq在文庫(ku)制備過程中需要(yao)進行(xing)PCR,主(zhu)要(yao)是為了獲得足(zu)夠(gou)上機反應(ying)的DNA量,如果提供的DNA樣品足(zu)量,可減少PCR循環數。因此由(you)PCR引(yin)起的偏向(xiang)性小。                                    

  • DNA 片段范圍的跨度會對后續測序有影響嗎?

    有影響,定量準確性、測序質量與數據產量都可能受到影響,而且跨度越大,影響越大。通常我們要求打斷后DNA電泳主帶在100-500 bp 范圍內,主峰介于200-300 bp。目前在建庫過程中允許的最長跨度為200 bp。
  • ChIP-Seq是否需要做陰性對照測序?

    通常可以選擇Input作為對照進行測序,也可根據經費情況靈活安排。
  • 哪些因素會影響ChIP-Seq的結果?

    抗體的質量與特異性、實驗設計、ChIP的實驗操作、DNA片段長度范圍、測序深度、測序質量等都會影響ChIP-Seq的結果。