簡述真核(he)轉錄組常(chang)規建庫流程
1）通(tong)過(guo)磁珠和(he)mRNA的polyA結構將mRNA分(fen)離出來；
2）mRNA片段化；
3）mRNA反轉錄為雙鏈(lian)結構(gou)，第二鏈(lian)cDNA合成(cheng)時，其中的(de)堿(jian)基T，被替換成(cheng)U，從(cong)而達到鏈(lian)特異性文庫的(de)目的(de)；
4）5’末(mo)端修復(fu)、3’末(mo)端加A；
5）加接頭；
6）選擇特異長度回(hui)收，一般為300bp；
7）PCR；
8）上機測序。
如何對得到的數目較多的差異基因進行后期驗證？
首先根據GO或者KEGG富集結果，或者客戶關注(zhu)的(de)(de)基因，選取有代表性的(de)(de)進行qRT-RCR驗證。然后(hou)根據RPKM值，選擇RPKM值差異倍數答(da)，同(tong)時p值小的(de)(de)基因進行qRT-RCR驗證。
