提供樣品(pin)時請(qing)注意:
1、菌液
如果提(ti)(ti)供菌(jun)液來測序(xu),請提(ti)(ti)供0.5ml以(yi)上(shang)的新鮮菌(jun)液,我(wo)(wo)們會為(wei)您培養并(bing)免(mian)費抽提(ti)(ti)質粒(li)。 若您的菌(jun)株(zhu)需要培養條件(jian),或為(wei)噬(shi)菌(jun)體,您提(ti)(ti)供5ml新搖(yao)菌(jun)液的沉淀菌(jun)體,將沉淀菌(jun)體裝(zhuang)在離心管中,用封(feng)口膜封(feng)好后交給我(wo)(wo)們的工作人員(yuan)或郵寄給我(wo)(wo)們。這樣我(wo)(wo)們可(ke)以(yi)直接抽提(ti)(ti)質粒(li)進(jin)行測序(xu)。
2、質粒
如果您提供質粒來測序,請用質量較好的試劑盒抽提,以保證質粒的純度可以達到全自動熒光測序的要求。提供質粒測序時,要求:濃度>100ng/微升,體積在10微升以上(對于每個樣品只測一個反應的情況)。如果每個樣品需測幾個反應,則送樣時需相應提高樣品的量。請將質粒溶解在ddH2O中(請勿溶解在TE溶液中)。
注:無論您提供菌液或質粒,請您務必寫明載體的名稱、插入片段的大小和位置、選用的測序引物名稱或序列,并且盡可能的標明測序引物距離插入片段的位置(請您注意測序引物及引物后會有20-50個堿基不能準確讀出)。如果提供特殊測序引物,請一定寫明引物濃度和序列,并且一定要提供高純度的引物,濃度要大于5pmol/ul。
3、PCR產物
如(ru)果(guo)您(nin)提(ti)供PCR產物原液來(lai)測(ce)(ce)(ce)序(xu),請確信PCR產物為單一(yi)擴增條(tiao)帶,片段(duan)大小在150—2000bp之間,且體積(ji)≥50ul,濃(nong)度≥50ng/ul。DNA總量(liang)必須(xu)大于(yu)(yu)2微克(ke),由(you)我們進行(xing)瓊脂(zhi)糖凝膠電泳割(ge)膠純化,然后再來(lai)測(ce)(ce)(ce)序(xu)。小于(yu)(yu)150bp和(he)大于(yu)(yu)2Kb的DNA片段(duan)請克(ke)隆后再測(ce)(ce)(ce)序(xu)。
如果您提(ti)供(gong)已經純化后的(de)PCR產物(wu)來測(ce)序,請(qing)您進行(xing)Agarose凝(ning)膠電泳純化,然后用(yong)質量(liang)較好(hao)的(de)試(shi)劑盒回(hui)收,將回(hui)收的(de)DNA溶(rong)(rong)解在(zai)滅菌過的(de)去離子水(shui)中(請(qing)不要(yao)溶(rong)(rong)解在(zai)TE中),并(bing)確(que)信(xin)PCR產物(wu)為(wei)單(dan)一擴增條(tiao)帶。要(yao)求:濃度(du)>50ng/微(wei)升,提(ti)供(gong)10微(wei)升以上(shang)(對于(yu)每(mei)個(ge)樣(yang)(yang)品只測(ce)一個(ge)反應(ying)(ying)的(de)情況)。如果每(mei)個(ge)樣(yang)(yang)品需測(ce)幾個(ge)反應(ying)(ying),則送(song)樣(yang)(yang)時需相(xiang)應(ying)(ying)提(ti)高樣(yang)(yang)品的(de)量(liang)。同(tong)時提(ti)供(gong)PCR引物(wu),準確(que)標明引物(wu)濃度(du),濃度(du)要(yao)求大于(yu)5pmol/ul,并(bing)確(que)信(xin)是高純度(du)的(de)引物(wu)。
由于PCR產物測序相對較難,為得到較好的測序結果,送樣時請盡量滿足上述要求。