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科研服務

Sanger測序

提供(gong)樣品時請注意:

1、菌液

如(ru)果(guo)提(ti)供(gong)菌(jun)液(ye)來測序,請提(ti)供(gong)0.5ml以(yi)上(shang)的新(xin)鮮菌(jun)液(ye),我們會為(wei)您培養并免費抽提(ti)質粒。 若您的菌(jun)株需要培養條(tiao)件,或(huo)為(wei)噬(shi)菌(jun)體(ti),您提(ti)供(gong)5ml新(xin)搖菌(jun)液(ye)的沉淀菌(jun)體(ti),將沉淀菌(jun)體(ti)裝在離心管中,用封(feng)口(kou)膜(mo)封(feng)好后交給我們的工作人員(yuan)或(huo)郵寄給我們。這樣我們可以(yi)直(zhi)接(jie)抽提(ti)質粒進行測序。

2、質粒

如果您提供質粒來測序,請用質量較好的試劑盒抽提,以保證質粒的純度可以達到全自動熒光測序的要求。提供質粒測序時,要求:濃度>100ng/微升,體積在10微升以上(對于每個樣品只測一個反應的情況)。如果每個樣品需測幾個反應,則送樣時需相應提高樣品的量。請將質粒溶解在ddH2O中(請勿溶解在TE溶液中)。

注:無論您提供菌液或質粒,請您務必寫明載體的名稱、插入片段的大小和位置、選用的測序引物名稱或序列,并且盡可能的標明測序引物距離插入片段的位置(請您注意測序引物及引物后會有20-50個堿基不能準確讀出)。如果提供特殊測序引物,請一定寫明引物濃度和序列,并且一定要提供高純度的引物,濃度要大于5pmol/ul。

3、PCR產物

如果您提供(gong)PCR產物原液來測序,請(qing)確信PCR產物為單一(yi)擴(kuo)增條帶,片段大(da)小在(zai)150—2000bp之間,且體積≥50ul,濃度(du)≥50ng/ul。DNA總量必須大(da)于(yu)2微(wei)克,由我們進行(xing)瓊脂糖(tang)凝膠電泳割膠純化,然后(hou)(hou)再(zai)來測序。小于(yu)150bp和大(da)于(yu)2Kb的DNA片段請(qing)克隆(long)后(hou)(hou)再(zai)測序。

如果您提供(gong)已經純(chun)化后的(de)PCR產物(wu)來測(ce)序(xu),請(qing)您進行(xing)Agarose凝膠電泳純(chun)化,然后用質量(liang)(liang)較好的(de)試劑盒回收(shou),將回收(shou)的(de)DNA溶(rong)解(jie)在滅菌(jun)過(guo)的(de)去離子水中(請(qing)不要(yao)溶(rong)解(jie)在TE中),并(bing)(bing)確(que)信(xin)PCR產物(wu)為單(dan)一擴增條帶。要(yao)求:濃度(du)>50ng/微升,提供(gong)10微升以上(對于每個樣(yang)品只測(ce)一個反應(ying)的(de)情況(kuang))。如果每個樣(yang)品需測(ce)幾(ji)個反應(ying),則送樣(yang)時需相應(ying)提高(gao)樣(yang)品的(de)量(liang)(liang)。同時提供(gong)PCR引物(wu),準確(que)標明引物(wu)濃度(du),濃度(du)要(yao)求大于5pmol/ul,并(bing)(bing)確(que)信(xin)是高(gao)純(chun)度(du)的(de)引物(wu)。

由于PCR產物測序相對較難,為得到較好的測序結果,送樣時請盡量滿足上述要求。